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太谷核不育小麦Ms2近等基因系的差异蛋白组学研究的中期报告
该研究旨在通过差异蛋白组学方法探究太谷核不育小麦Ms2近等基因系中与育性相关的基因及其调控网络。本中期报告主要介绍了研究过程中的实验设计、蛋白质提取及质量分析、差异蛋白质鉴定及生物信息学分析等方面的进展情况。
实验设计：
使用双向电泳技术分析了太谷核不育小麦Ms2近等基因系与其育性恢复系（Ms2背景下搭配有保持系）的幼穗样品中差异表达的蛋白质，并结合生物信息学方法及文献综述对筛选出的差异蛋白进行功能注释、互作网络预测等研究，以揭示不育转化的分子机制及相关调控网络。
蛋白质提取及质量分析：
采用三步法提取幼穗中的总蛋白质，并通过Bradford法测定蛋白质浓度。SDS-PAGE和2-DE电泳技术分析样品蛋白质组成，并通过CoomassieBrilliantBlueG-250染色法确定电泳图谱图像的清晰度和蛋白质分离效果。
差异蛋白质鉴定：
采用二维凝胶电泳技术对Ms2与育性恢复系样品中的差异蛋白进行筛选。利用PDQuest软件进行差异蛋白的分子质量、等电点、表达量统计。同时，采用MALDI-TOF/TOF-MS技术进行氨基酸组成和结构分析，确定受检差异蛋白的氨基酸序列。
生物信息学分析：
对差异蛋白进行GO生物学过程、KEGG通路分析，鉴定不育转化过程中涉及的信号通路及代谢途径。通过STRING数据库中蛋白官能域及拓扑结构验证蛋白相互作用网络，借助SimplifiedNetworks对相关调节因子进行编码，揭示扮演关键角色的蛋白及其调控机制。
结论：
通过双向电泳、二级质谱技术筛选，共鉴定到70余个差异蛋白，部分差异蛋白的氨基酸序列未知。生物信息学分析发现这些差异蛋白涉及多种信号通路及代谢途径，如光合作用、TCA循环、氧化磷酸化等，体现了不育转化过程复杂的代谢调节网络。未来将根据差异蛋白对应基因的表达及基因本体论等分子生物学角度，揭示天然突变及表达量调控背后的分子机制，深入解释不育转化的分子机制。