猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立的中期报告.docx

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立的中期报告
本实验旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪博卡病毒的多重PCR检测方法。本次中期报告主要介绍实验过程和初步结果。
1.实验材料
本实验所使用的病毒标准物质分别为PEDV、TGEV和PoBoV，三者均为冻干粉；猪细胞株为ST，质粒pUC18包含三个病毒的片段。
2.实验方法
(1)提取病毒RNA
将病毒标准物质溶解后，按照RNeasyMiniKit使用说明提取RNA。
(2)合成cDNA
采用PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser使用逆转录酶合成cDNA。
(3)多重PCR反应
合成的cDNA作为模板，利用对应的引物和TaqMan®探针进行PCR反应。
3.初步结果
针对PEDV、TGEV和PoBoV的引物和探针均能扩增出正确的目标带。经验证，该方法能检测到不同浓度的三个病毒标准物质，并能在不同体系的猪样本中扩增出目标带。未出现假阳性结果。
4.计划下一步实验
继续检测不同体系的猪样本，增加样本数，并进行序列分析。最终目标为建立一种敏感、特异、简便、快速的多重PCR检测方法，用于猪传染性胃肠炎等疾病的早期诊断和防控。