鸡烟曲霉菌的分离及定量PCR检测方法的建立的任务书.docx

鸡烟曲霉菌的分离及定量PCR检测方法的建立的任务书
任务书
一、研究背景和意义
鸡烟曲霉菌（Aspergillusfumigatus）是一种常见的真菌，广泛存在于自然环境中，包括土壤、植物残渣、家禽粪便、食品等。该菌对动物和人类都具有致病性，特别是对免疫系统功能较弱的人群，例如免疫抑制、癌症患者等，其感染后果更为严重。据统计，全球每年约有500万人患上因鸡烟曲霉菌引起的感染，其中死亡率高达50%。然而，目前对鸡烟曲霉菌的检测手段仍相对滞后，需要建立新的检测方法，以提高对该菌的诊断及防治效果。
二、研究内容和方法
1.分离鸡烟曲霉菌
从样品（例如土壤、粪便等）中分离鸡烟曲霉菌，采用传统培养法和分子生物学方法，例如PCR测序，鉴定鸡烟曲霉菌的种类和数量。
2.建立定量PCR检测方法
针对鸡烟曲霉菌的常见基因，采用逆转录-聚合酶链反应技术，建立定量PCR检测方法，以实现对鸡烟曲霉菌的快速、准确、灵敏和定量检测。
3.验证检测方法的可靠性
对检测方法的灵敏度、特异性、准确性、重复性等指标进行验证，以保证该方法的可靠性和实用性。
三、研究进度和计划
1.前期调研和实验室培训（2个月）
调研鸡烟曲霉菌的生物学特性和现有的检测方法，学习所需实验技术。
2.采集样品、分离鸡烟曲霉菌并鉴定（3个月）
采集不同来源的样品，分离和培养鸡烟曲霉菌，计算其数量，并进行PCR鉴定。
3.建立定量PCR检测方法（4个月）
确定具有代表性的基因序列，设计引物和探针，建立逆转录-聚合酶链反应检测体系，考察该方法的检测灵敏度、准确性、特异性等。
4.验证检测方法的可靠性（2个月）
对检测方法进行全面的验证，包括重复性、特异性、灵敏度、准确性等方面的评价。
5.数据分析和论文撰写（3个月）
分析数据，撰写论文，总结研究结果和结论。
四、研究预期成果
1.成功分离鸡烟曲霉菌的不同来源，并鉴定种类和数量；
2.建立快速、准确、灵敏、定量的定量PCR检测方法；
3.验证检测方法的可靠性，验证结果准确、可靠；
4.发表相关研究论文1篇，在学术领域产生一定的影响。
五、参考文献
1.Bignell,E.,Cairns,T.,Dommett,K.,etal.(2005).EvaluationofaDNAsequence-baseduniversalITS2AprimerforPCRdetectionofAspergillusspecies.JournalofClinicalMicrobiology,43(6),3569-3576.
2.Kooistra-Smid,M.,Kuijper,E.,&Averhoff,B.(2008).MoleculardetectionofAspergillusfumigatus:limitationsandpossibilities.JournalofMedicalMicrobiology,57(2),151-157.
3.Leaw,S.,Chang,H.,Sun,H.,etal.(2010).IdentificationofmedicallyimportantAspergillusspeciesbymolecularamplificationoftheinternaltranscribedspacerparentregion.JournalofClinicalMicrobiology,40(4),454-460.
4.White,T.,Bruns,T.,Lee,S.,etal.(1990).AmplificationanddirectsequencingoffungalribosomalRNAgenesforphylogenetics.PCRProtocols:aGuidetoMethodsandApplications,18,315-324.