栉孔扇贝染色体的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106893766A(43)申请公布日2017.06.27(21)申请号201510947631.9(22)申请日2015.12.17(71)申请人焦秀花地址266600山东省青岛市莱西市水集街道办事处二村(72)发明人焦秀花(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称栉孔扇贝染色体的制备方法(57)摘要本发明涉及一种栉孔扇贝染色体的制备方法，步骤如下：（1）浓缩收集栉孔扇贝担轮幼虫于1.5mL离心管中，以0.01%秋水仙素处理样品0.5-1.5h；（2）滤掉秋水仙素，用70-80mMKCl溶液进行低渗处理20-40min；（3）向离心管中加满Carnoy's固定溶液进行固定，并置于30-50rpm摇床上不断摇晃，每隔15-30min更换一次固定液，共计三次；（4）室温5000-10000rpm离心0.5-1.5min，弃上清液后用50%乙酸溶液对材料进行解离，将细胞解离液在事先45-55℃预热的载玻片上悬空滴片；（5）将滴好的载玻片置于45-55℃烘箱5-15min后，室内干燥1-2天，即可使用。本发明选择了细胞分裂最为旺盛的担轮幼虫时期进行染色体的制备，制备成功率非常高，每张载玻片上可找到6-8个处于分裂相的染色体。且本发明的方法简单易行，适合大批量制备。CN106893766ACN106893766A权利要求书1/1页1.一种栉孔扇贝染色体的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）浓缩收集栉孔扇贝担轮幼虫于1.5mL离心管中，以0.01%秋水仙素处理样品0.5-1.5h；（2）滤掉秋水仙素，用70-80mMKCl溶液进行低渗处理20-40min；（3）向离心管中加满Carnoy's固定溶液进行固定，并置于30-50rpm摇床上不断摇晃混匀，每隔15-30min更换一次固定液，共计三次；（4）室温5000-10000rpm离心0.5-1.5min，弃上清液后用适量的50%乙酸溶液对材料进行解离，将细胞解离液在事先45-55℃预热的载玻片上悬空滴片；（5）将滴好的载玻片置于45-55℃烘箱5-15min后，室内干燥1-2天，即可使用。2.根据权利要求1所述的栉孔扇贝染色体的制备方法，其特征在于，所述秋水仙素的浓度为质量体积浓度，溶剂为海水。3.根据权利要求1所述的栉孔扇贝染色体的制备方法，其特征在于，所述的Carnoy's固定溶液成分为：体积比3：1的酒精：冰乙酸。4.根据权利要求1所述的栉孔扇贝染色体的制备方法，其特征在于，步骤（4）中悬空高度为15-40cm。5.根据权利要求1所述的栉孔扇贝染色体的制备方法，其特征在于，所述50%乙酸中的比例为体积比。2CN106893766A说明书1/2页栉孔扇贝染色体的制备方法[0001]技术领域[0002]本发明涉及一种栉孔扇贝染色体的制备方法。背景技术[0003]基因定位在基因组研究中占有很重要的地位，既有助于基因序列的测定，又有利于对基因结构和功能的研究，以进一步提示生物的遗传信息。基因的染色体定位方法多种多样，它可分为基因的遗传作图和物理作图，而物理作图中最传统的是荧光原位杂交（Fluorescenceinsituhybridization,FISH）。FISH通过特定分子的荧光标记探针在细胞内与染色体上特定的互补核酸序列原位杂交，通过激发杂交探针的荧光来检测信号。由于荧光染料收到一定波长（即激发波长）的光激发后会发射荧光（即发射波长），所以就滤光镜选择合适的激发波长的光，即可显示某一特定的荧光染料，于是就可以直接显示染色体上的基因序列间的相互位置关系。染色体制备作为基因定位的第一步，就显得尤为重要。发明内容[0004]针对上述问题，本发明旨在提供一种栉孔扇贝（ChlamysFarreri）染色体的制备方法。[0005]一种栉孔扇贝染色体的制备方法，步骤如下：（1）浓缩收集栉孔扇贝担轮幼虫于1.5mL离心管中，以0.01%秋水仙素处理样品0.5-1.5h；（2）滤掉秋水仙素，用70-80mMKCl溶液进行低渗处理20-40min；（3）向离心管中加满Carnoy's固定溶液进行固定，并置于30-50rpm摇床上不断摇晃混匀，每隔15-30min更换一次固定液，共计三次；（4）室温5000-10000rpm离心0.5-1.5min，弃上清液后用适量的50%乙酸溶液对材料进行解离，将细胞解离液在事先45-55℃预热的载玻片上悬空滴片；（5）将滴好的载玻片置于45-55℃烘箱5-15min后，室内干燥1-2天，即可使用。[0006]所述秋水仙素的浓度为质量体积浓度，溶剂为海水。[0007]所述的Carnoy's固定溶液成分为：体积比3：1的酒精：冰乙酸。[