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红掌组织的快速繁殖 红掌,是天南星科花烛属多年生常绿植物,叶革质光亮,单花顶生,花期长达1个半月左右。利用常规播种、分株法繁殖花红掌繁殖率极低,播种繁殖所需时间长,且易产生变异。利用组织培养快速繁殖切花红掌,可满足市场的大量需求。 1材料与方法 1.1材料 学校大棚内的优质红掌品种。 1.2方法 1.2.1外植体灭菌处理 取切花红掌的幼嫩叶片及叶柄作为供试材料,首先在流水下冲洗1小时,同时用毛刷轻轻刷洗,在消毒前先将叶片切成1.5cm×1.5cm左右的小片,将叶柄切成1.5cm左右长的小段,将其放入灭过菌的广口瓶中用75%酒精浸泡30秒后,再用0.1%HgCl2浸泡消毒8分钟,用无菌水冲洗5次,在无菌纸上把叶片切成1cm×1cm左右的小片,叶柄切成1cm左右的小段,接种在灭过菌的培养基上,所有无菌操作必须在超净工作台内进行。1.2.2培养基及培养条件 基本培养基为MS加蔗糖30g/L、琼脂6g/L,pH值5.8.在不同培养阶段添加不同种类和浓度的植物生长调节剂,培养温度为25℃±1℃,光照强度2000~3000lux,每日光照14小时(除刚接种的外植体暗培养3-5h外)。湿度为80%-90%。 1.2.3不同外植体,即幼嫩叶与叶柄的分化程度比较 将2种不同外植体分别接种于MS+6-BA1.5+NAA0.7的同一培养基上,每周观察一次,并记录下其愈伤组织的生长情况。1.2.4不同浓度的6-BA对愈伤组织的诱导影响 将消过毒的叶片接种到不同浓度的6-BA的MS+6-BA+NAA0.7的培养基上进行培养,6-BA的浓度如下:(单位:mg/L)0;0.5;1.0;1.5;2.0;2.5. 1.2.5愈伤组织的增殖 当诱导成功的愈伤组织块长到1cm-1cm左右时,将其切成 0.3cm–0.3cm转移到培养基MS+6-BA0.5+CM10%上,反复继代培养。经培养,愈伤组织会继续增大,每五天观察一次,记录下长出不定芽的时间,并继续观察,每五天一次,当不定芽长至3片叶子时,愈伤组织增殖基本停止。 1.2.6诱导生根 将先分化且已长至3片叶以上的植株移入生根培养基中诱导生根,采用3种不同培养基,对生根速度和生根率进行比较。4种培养基的类型如下(单位:mg/L):MS+IBA2.0;MS+IBA1.0;MS+IBA2.0+NAA0.5。培养5天后,每天观察一次。记录下开始生根的时间。 1.2.7幼苗移栽 当植株长至3条根,根长2cm,3片叶以上即可移栽。红掌组培苗经过诱导生根形成完整植株后,适应自然环境的能力还非常低。幼苗移植前,需将瓶苗开盖移置室外阴凉处炼苗7-10d,使其适应从无菌到有菌,从光照、温度及湿度等条件的相对稳定到不稳定的变化。移栽时先倒出培养基,小心洗去残留在根上的培养基,全株用800-1000倍甲基托布津溶液浸洗3min,以椰康:泥炭土=2:1制成培养基质,在遮光度为50%的阴棚内培育。移植初期用喷枪早中晚各喷水1次,保持基质湿润,20d左右后长出新叶,随后,每星期喷 施MS溶液1次,待小苗长至10-15cm高时,即可上盆栽培。 2讨论 在红掌的组织培养过程中,首先诱导产生优质愈伤组织,分化出芽点多的优良无性系作为快繁材料,这样就能在短时间内生产大量优质种苗。从培养基移栽入土,是从异养到自养的转变。试管异养条件是在无菌、高湿、低光照、温度稳定的环境中生长,而温室是相对干燥、强光、温差大的环境,因此,在试管苗移栽驯化期,要根据红掌的生理特点及试管苗特点选择透气、保温好、适合红掌生长的移栽基质,要保证适宜的温度和湿度,创造良好的生长环境,减少病虫害,提高移栽成活率。众所周知,高浓度的细胞分裂素会造成植株的不可预知变异,在上述组培快繁技术中所用分裂素浓度虽未引起明显变异,但浓度大小一定要合适。