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肝癌细胞的原代分离及肝癌干细胞的初步筛选的开题报告
摘要：
肝癌是一种具有高度侵袭性和复发性的恶性肿瘤，其发病率和死亡率较高。肝癌干细胞是一种表现出强大的自我更新、增殖和分化的细胞群体，是肝癌复发和耐药的主要原因。本研究旨在通过原代肝癌细胞的分离和肝癌干细胞的初步筛选，为深入研究肝癌干细胞的生物学机制和寻找肝癌新的治疗靶点提供实验基础。
研究内容：
1.原代肝癌细胞的分离
根据临床肝癌组织样本的要求，利用外科手术切除癌症肝组织，将组织样本放入磷酸盐缓冲液中，利用组织块分离酶和较强的机械分离强制的处理方法将肝癌组织分离为小碎片。再利用胰酶和胆汁酸酶等多重酶处理，将得到的细胞用15%FBS/PBS洗涤，免疫荧光染色对肝癌细胞和其他非肝癌细胞进行鉴定，筛选出符合要求的原代肝癌细胞。
2.肝癌干细胞的初步筛选
利用CD133抗体分选技术，将原代肝癌细胞中的CD133+细胞和CD133-细胞分别分离出来。并对CD133+细胞和CD133-细胞进行基因表达谱分析。并通过体外的肿瘤球形体形成性和裸鼠移植实验证明CD133+细胞具有肝癌干细胞的特性。
预期结果：
1.成功分离出符合要求的肝癌细胞。
2.具有肝癌干细胞特性的CD133+细胞被筛选出来。
3.对于CD133+细胞的分子机制和肿瘤生物学特性的研究提供了实验基础。
关键词：肝癌；原代细胞；肝癌干细胞；CD133+细胞
Abstract:
Livercancerisamalignanttumorwithhighinvasivenessandrecurrencerate,andtheincidenceandmortalityratearehigh.Livercancerstemcellsareagroupofcellsthatexhibitstrongself-renewal,proliferation,anddifferentiation,andarethemaincauseoflivercancerrecurrenceanddrugresistance.Thisstudyaimstoprovideexperimentalbasisforin-depthstudyofthebiologicalmechanismsoflivercancerstemcellsandfindingnewtherapeutictargetsforlivercancerthroughprimaryisolationoflivercancercellsandpreliminaryscreeningoflivercancerstemcells.
Researchcontent:
1.Isolationofprimarylivercancercells
Accordingtotherequirementsofclinicallivercancertissuesamples,cancerouslivertissuewasremovedbysurgicalresection,andthetissuesamplewasplacedinaphosphate-bufferedsolution.Thelivercancertissuewasseparatedintosmallfragmentsusingatissueblockseparationenzymeandstrongmechanicalseparation.Theobtainedcellsweretreatedwithmultipleenzymessuchastrypsinandbileacidenzymes,washedwith15%FBS/PBS,andimmunofluorescencestainingtoidentifylivercancercellsandothernon-livercancercells,andscreenoutqualifiedprimarylivercancercells.
2.Preliminaryscreeningoflivercancerstemcells
CD133antibodysortingtechnologywasusedtoseparateCD133+cellsandCD133-cellsfromprimarylivercancercells.GeneexpressionprofileanalysiswasperformedonCD133+cellsandCD133-cells.InvitrotumorspheroidformationandnudemousetransplantationexperimentswereperformedtodemonstratethatCD133+cellshavethecharacter