拟南芥ICEs基因家族突变体筛选及功能初步分析的任务书.docx

拟南芥ICEs基因家族突变体筛选及功能初步分析的任务书
任务概述：
拟南芥ICEs基因家族是一个重要的转录因子家族，参与拟南芥植物的生物逆境响应。本次任务的目标是筛选拟南芥ICEs基因家族的突变体，并对其进行功能初步分析。任务将分为两个主要部分：1）突变体筛选；2）功能分析。
任务分配：
本次任务将分为几个环节，每个环节由不同的成员来负责完成。任务分工如下：
1.基因突变：王老师、李老师；
2.荧光定量PCR：张同学、刘同学；
3.功能分析：陈同学、杨同学、赵同学。
任务具体内容：
1.突变体筛选
1.1突变体构建
王老师和李老师将负责突变体构建。主要任务包括：设计引物和构建突变质粒，分别用荧光定量PCR进行验证。具体步骤如下：
a.设计引物：详细阅读ICEs基因家族的序列信息，选择合适的引物，并使用Primer3等软件进行引物的设计与检查；
b.构建突变质粒：通过PCR扩增和克隆技术将目标DNA片段插入突变质粒，构建突变体；
c.荧光定量PCR检测：使用目的基因和指标基因的荧光引物，进行比较定量PCR检测，并验证突变体是否成功构建。
1.2突变体筛选
张同学和刘同学将负责突变体筛选。主要任务包括：稀释突变单元、播种筛选、转移选株，检测选株素质。具体步骤如下：
a.稀释突变单元：将突变元胞稀释后将不同浓度的稀释液均匀涂抹在加工质单元板中；
b.播种筛选：在黑暗条件下，将处理好的拟南芥种子播放进加工质单元板；
c.转移选株：将单株转移至MS培养基、沙土或液体培养基中，经过筛选，上报筛选良好的选株；
d.检测选株素质：对于筛选得到的突变体进行扩增与鉴定、RT-PCR、Westernblot、基因芯片等多种技术检测，鉴定其核酸和蛋白质水平表达量、转录水平等。
2.功能初步分析
陈同学、杨同学和赵同学将负责功能初步分析，主要任务是：对筛选到的突变体进行功能鉴定。具体步骤如下：
a.基因表达分析：经过RNA抽取后，用RT-PCR或基因芯片等技术进行检测，鉴定其基因表达水平；
b.生长情况观察：在不同生长条件下，对拟南芥突变株进行观察，统计生长数据；
c.生理生化参数检测：测定突变体中的光合速率、反式构化酶活性、抗氧化酶活性等生理生化参数，并与野生型拟南芥进行比较。
任务总结：
本次任务的主要目的是筛选ICEs基因家族突变体，并对其进行功能初步分析。突变体筛选过程分为突变体构建和突变体筛选两个步骤，其中构建突变体主要由王老师和李老师完成，突变体筛选（稀释突变单元、播种筛选、转移选株，检测选株素质）由张同学和刘同学负责。功能初步分析主要由陈同学、杨同学和赵同学完成，需对筛选到的突变体进行基因表达分析、生长情况观察、生理生化参数检测等操作。