六倍体小麦非生物胁迫WRKY转录因子的筛选与功能分析的任务书.docx

六倍体小麦非生物胁迫WRKY转录因子的筛选与功能分析的任务书
任务书
项目名称：六倍体小麦非生物胁迫WRKY转录因子的筛选与功能分析
任务目标：
1.筛选得到六倍体小麦非生物胁迫响应的WRKY家族转录因子。
2.利用生物信息学方法对筛选得到的六倍体小麦WRKY家族转录因子进行序列、结构等分析，并进行分类鉴定。
3.利用植物遗传转化技术，构建六倍体小麦中胁迫响应的WRKY家族转录因子过表达的植物表达载体，进行转化育种。
4.对六倍体小麦中的WRKY转录因子过表达植株及野生型植株进行非胁迫、低温胁迫、盐胁迫、干旱胁迫等不同类型的处理，利用生理生化和分子生物学方法研究该家族转录因子在抵御胁迫逆境中所起的生物学功能作用。
任务要求：
1.利用RNA-seq技术获取六倍体小麦不同组织中的WRKY家族转录因子表达信息。
2.设计反向PCR引物、RACE扩增引物及Real-timePCR引物，进行分子生物学技术鉴定。
3.利用Bioinformatics软件分析、分类鉴定六倍体小麦中的WRKY家族转录因子。
4.植物遗传转化实验的设计和操作。
5.利用干旱胁迫、低温胁迫、盐胁迫等方法进行实验，并进行野生型与转基因小麦植株的对比观察与生理生化及分子水平的分析。
6.能够熟练操作PCR扩增、荧光定量PCR等关键技术。
7.具有较强的数据分析和报告撰写能力。
任务计划：
第一年：
1.提取六倍体小麦不同组织中的总RNA并进行RNA质量检测。
2.构建cDNA文库并进行RNASeq测序。
3.进行反向PCR扩增、RACE扩增鉴定目标基因。
4.进行Bioinformatics分析得到六倍体小麦中WRKY家族转录因子序列和结构信息。
第二年：
1.利用PCR扩增六倍体小麦的目标基因，构建过表达载体，并进行植物遗传转化。
2.鉴定转基因植株并扩大其种子和植株。
3.对转基因小麦和野生型小麦进行非胁迫、低温胁迫、盐胁迫、干旱胁迫处理。
4.利用生理生化和分子生物学技术研究WRKY家族转录因子在抵御胁迫逆境中的作用机制。
第三年：
1.小麦的第二个生长季对转基因和野生型小麦进行田间试验。
2.对试验结果进行分析和总结，撰写相关论文。
参考文献：
1.Liuetal.(2016)AwheatSIMILARTORCD-ONEgeneenhancesseedlinggrowthandabioticstressresistancebymodulatingredoxhomeostasisandmaintaininggenomicintegrity,PlantPhysiology,170(3):1832-50.
2.Wangetal.(2018)Genome-wideidentificationandcomparativeanalysisoftheWRKYgenefamilyindiploidandhexaploidwheat,JournalofIntegrativeAgriculture,17(8):1757-1769.
3.Jiangetal.(2020)TheEvolution,FunctionalExpression,andPromoterAnalysisofTdWRKYTranscriptionFactorsinWheat,Plants,9(4):431.