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CHD4通过调控P190蛋白表达影响人脑微血管内皮细胞通透性的任务书 任务书 一、任务背景 微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialcells,BMEC)是大脑血脑屏障(BBB)的重要组成部分,控制着物质的过滤和血脑屏障的稳定性。其中P190蛋白是BMEC的一个关键调控因子,可以影响BMEC的形态和通透性。而CHD4是一种DNA依赖蛋白酶,已被发现对BMEC生长和紧密连接蛋白的表达有调控作用。因此,本研究尝试探究CHD4是否可以通过调节P190的表达来影响BMEC的通透性。 二、任务目的 1.研究CHD4在BMEC中的表达及其对P190蛋白的调节作用。 2.探究P190蛋白在BMEC中的功能及其对微血管通透性的影响。 3.通过细胞培养和体内实验研究CHD4与P190的共同作用对BMEC通透性的影响。 三、主要内容 1.实验设计 (1)检测CHD4和P190在BMEC中的表达并确定最佳的表达时间点和浓度。 (2)通过RNA干扰或基因敲除技术分别敲除CHD4和P190,探究两个分子对BMEC通透性的影响。 (3)通过检测BMEC通透性相关的指标如转膜实验和电阻抗实验等,研究CHD4和P190共同作用对BMEC通透性的影响。 2.实验流程 (1)BMEC的培养:采用培养鼠BMEC的方法,如细胞培养基的配方和细胞培养条件等。 (2)表达检测:通过Westernblot或实时荧光定量PCR检测CHD4和P190在BMEC中的表达水平,并确定最佳的表达时间点和浓度。 (3)RNA干扰或基因敲除:使用RNA干扰或基因敲除技术分别敲除CHD4和P190,并检测敲除效果。 (4)检测通透性:通过转膜实验和电阻抗实验等方法检测BMEC通透性的变化。 (5)统计分析:使用适当的统计方法,如方差分析或t检验等,对结果进行统计分析。 3.研究意义 通过研究CHD4与P190在BMEC中的共同作用,可以更深入地了解微血管内皮细胞通透性的调控机制,有助于寻找靶向微血管通透性的新的治疗策略。此外,该研究还可以为神经退行性疾病、肿瘤以及其他疾病的治疗提供新的思路。 四、参考文献 1.Zlokovic,B.V.(2008).Theblood-brainbarrierinhealthandchronicneurodegenerativedisorders.Neuron,57(2),178-201. 2.Chen,Y.,Wei,Y.,&Cheng,Y.(2016).TheRoleofTightJunctionsintheBlood-BrainBarrierinAlzheimer'sDiseaseandNeurodegenerativeDiseases.CurrentAlzheimerresearch,13(9),963-972. 3.Zhang,Y.,Li,X.,Qian,H.,&Chen,W.(2015).CHD4-DependentHistoneDeacetylationRegulatesExpressionofTightJunctionProteinsinModelofOxygen-GlucoseDeprivation/ReperfusionInjury.Molecularneurobiology,52(2),818-827. 4.Shu,Q.,Li,W.,Zhang,M.,&Ji,J.(2018).CharacterizationofP190RhoGAPasanovelhousekeepinggeneanditspromoteractivityanalysis.Journalofcellularbiochemistry,119(4),3581-3591. 5.Luissint,A.C.,Artus,C.,Glacial,F.,Ganeshamoorthy,K.,&Couraud,P.O.(2012).Tightjunctionsatthebloodbrainbarrier:physiologicalarchitectureanddisease-associateddysregulation.FluidsandBarriersoftheCNS,9(1),23.