黄瓜EMS诱变突变体库及TILLING平台的初步构建的任务书.docx

黄瓜EMS诱变突变体库及TILLING平台的初步构建的任务书
任务书：黄瓜EMS诱变突变体库及TILLING平台的初步构建
介绍
黄瓜（CucumissativusL.）是一种重要的蔬菜作物，在世界范围内广泛种植。由于其高产、易种、高营养价值、美味等特点，黄瓜已成为人们日常生活中不可或缺的重要食物。然而，黄瓜种植过程中仍存在一些局限性，例如对于病害、逆境等方面的耐受性不足，限制了其生长发育和产量。
作为一种典型的自交物种，黄瓜自交无异型现象，基因型相对稳定，易于进行基因功能研究。为加快黄瓜种质资源的开发和研究，我们需要建立一个黄瓜EMS诱变突变体库及TILLING平台，以快速获取突变型矮秆、短期生育、抗性等方面的荧光实时PCR检测标记，实现红色、绿色突变体的筛选和紫外辐射诱导的突变诱导方法。因此，本任务书意在构建一个黄瓜EMS诱变突变体库及TILLING平台，以期实现基因结构和功能的研究，提高黄瓜食品的品质和产量。
任务目标
1.建立黄瓜EMS诱变突变体库
建立一个包括1,000个左右黄瓜突变体的EMS诱变体库，每个突变体进行基因组DNA提取和塑料袋测序，获取突变型的(包括突变是否存在和突变的位置)关键基因的信息。
2.突变型黄瓜TILLING平台的构建
为筛选突变体并检测突变的关键基因进行TILLING分析，开发适用于突变型黄瓜的TILLINGPCR引物组，并建立TILLINGPCR响应标准曲线，最终建立黄瓜突变体TILLING子库和质量控制平台，为突变型基因功能分析提供无限的检测方法。
3.突变基因挖掘和突变位点鉴定
通过两步PCR挖掘突变基因(cas9施型，依次使用引物1和2或引物3和4)，同时建立突变基因鉴定方法(鉴别突变是否是单倍体突变，以便进行一代表型分析)和突变位点鉴定(利用基因编辑后收取幼叶提取DNA，通过DNA高通量测序进行突变位点鉴定。)
4.黄瓜突变体功能筛选和确认
通过花叶易位、打空芥末大小的突变、不同的基因删除、包括蒸发散减少、缩短生育期、抗锈病等特性，对黄瓜突变体进行大规模筛选和确认，形成大量可继续前向遗传学分析的突变体库。
总体步骤
1.构建黄瓜EMS诱变体库。
2.设计适用于突变型黄瓜的TILLINGPCR引物组，并建立TILLINGPCR响应标准曲线。
3.建立突变型黄瓜TILLING子库和质量控制平台。
4.突变基因挖掘和突变位点鉴定。
5.通过花叶易位、打空芥末大小的突变、不同的基因删除等筛选和确认突变体。
参考
1.胡鹏,陈国胜,吴爱萍,等.EMS诱变及TILLING技术在蔬菜育种中的应用[J].科技创新导报,2013,19(23):84-86.
2.杨健,李峰,陈记福,等.甜瓜EMS诱变体的建立[J].遗传,2008,30(3):304-308.
3.曾琴芳,杨士勋,梁程庆,等.从基因到物质追踪黄瓜单染色体显性白斑点基因[C].第十三届全国植物基因组学大会暨第五次植物分子遗传学学术研讨会,2009.