基于小鼠巨细胞病毒M84抗原优势表位的VLP疫苗的研究的开题报告.docx

基于小鼠巨细胞病毒M84抗原优势表位的VLP疫苗的研究的开题报告
一、研究背景和意义
小鼠巨细胞病毒（MCMV）是一种广泛存在于野生鼠类中的病毒，在实验室小鼠中感染率高达100%。MCMV感染所导致的炎症反应和免疫应答会影响研究小鼠的结果，尤其影响到免疫学、遗传学、肿瘤学、神经科学等领域的研究。因此，开发一种有效的MCMV预防性疫苗对于保障实验室动物健康和提高科学研究质量具有重要意义。
MCMV病毒外壳蛋白主要由M84、M100和M55三种蛋白组成。其中M84蛋白作为一种特异性高的抗原，在MCMV疫苗研究中备受关注。研究表明，M84蛋白的N-端163-aa序列存在一段高度免疫原性的区域，具有优势表位特性。与MCMV感染小鼠相比，具有M84优势表位疫苗免疫的小鼠明显降低感染率、病程迟缓，且免疫后仍能产生长期的细胞免疫应答。
二、研究目的
本研究旨在构建基于M84表位的病毒样颗粒（VLP）疫苗，并探究其在小鼠体内的免疫效果。具体目的包括：
1.基于M84优势表位设计并合成疫苗肽。
2.利用表达技术构建M84表位VLP疫苗。
3.通过小鼠模型研究疫苗的免疫保护效力、抗体产生情况、细胞免疫学应答和安全性。
三、研究方案
1.疫苗肽设计与合成
根据MCMVM84蛋白N-端序列的免疫原特性和优势表位的位置，在163-aa序列中选择离N-端较远的107-127aa段作为疫苗肽。设计获得MCMVM84蛋白疫苗肽并在合成前进行纯度检测和质量分析。
2.VLP疫苗构建
利用大肠杆菌表达技术构建M84表位VLP疫苗，先将疫苗肽插入到细菌表达载体pET-22b+的限制性内切酶切位点中，然后转化至BL21(DE3)菌株中进行大规模发酵和表达。对表达后的蛋白进行纯化、鉴定并进行VLP形态鉴定。
3.免疫保护效力、抗体产生情况和细胞免疫学应答研究
选择BALB/c小鼠为实验对象，按照一定的免疫方案接种M84表位VLP疫苗，通过ELISA检测抗体和CD8+T细胞的水平，流式细胞术分析免疫细胞的表面标志物和细胞亚群，同时探究对MCMV感染的保护效力和安全性。
四、预期结果
通过本研究，预计可以获得如下的结果：
1.成功合成MCMVM84蛋白疫苗肽，并通过质量控制检测合成品的质量达到要求。
2.成功构建出M84表位VLP疫苗并进行了形态和纯度分析。
3.免疫小鼠后，疫苗能够引起小鼠产生明显的细胞免疫应答和抗体产生，并具有保护作用。
4.疫苗安全性评价良好。
五、研究意义
本研究基于MCMVM84蛋白的优势表位设计并构建出了M84表位VLP疫苗，通过小鼠模型验证了疫苗的免疫效果和安全性。本研究的开展不仅为开发MCMV的预防性疫苗提供了一种新思路和新方法，同时也为预防其他病原体的疫苗研究提供了启示。此外，本研究的应用还可以推进实验室动物健康，保障动物福利，并提高科学研究质量，具有广泛的应用前景和社会效益。