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基于甘蓝型油菜小孢子培养和胚状体诱导的植株再生、转化与诱变体系的构建的任务书
任务书
题目：基于甘蓝型油菜小孢子培养和胚状体诱导的植株再生、转化与诱变体系的构建
任务目的：
1.构建一套高效的油菜再生体系，为油菜品种改良和基因转化研究提供技术支持；
2.利用诱变技术快速获得新的优质、高产、适应性强的油菜品种。
任务描述：
1.制备油菜小孢子培养的筛选培养基，筛选适合小孢子轴伸长的激素组合和浓度。
2.利用小孢子培养技术，培养出高效诱导胚状体的油菜小孢子，并优化诱导胚状体的培养基。
3.优化油菜胚状体的转化体系，探究影响油菜转化效率的因素及其优化方法，通过对比实验选择最优的基因转化方法。
4.通过植物诱变技术，制备油菜诱变体系，并培养出高效的油菜诱变体，分离其中表现良好的优质、高产、适应性强的油菜品种。
任务步骤：
1.筛选适合油菜小孢子培养的基本培养基，包括拟南芥培养基、MS培养基、B5培养基等。通过对小孢子轴的生长情况以及成活率的观察，确定最优的培养基。
2.根据前期文献和经验积累，设计不同浓度和种类的激素组合，利用其在小孢子培养基上诱导出胚状体。通过实验数据对比，选择出最优的激素组合和浓度。
3.优化转化体系，针对目标基因，优化转化载体、电穿孔、冷冻植入等转化方法。通过PCR、RT-PCR等方法对转化效率进行评价，并选择最优的转化方法。
4.制备油菜诱变体系，先采用较低的诱变剂浓度进行处理，并筛选出表现良好的诱变体进行进一步处理和筛选。通过植株性状的观察以及酶活性和基因表达水平的差异分析，选择性状稳定的诱变体。
任务成果：
1.完成油菜小孢子培养筛选培养基、激素组合和浓度实验，确定最优的小孢子培养基和胚状体诱导方法。（已完成）
2.开展复杂性激素组合和浓度比对实验，进一步提高小孢子发育效率。（正在开展中）
3.构建油菜胚状体转化体系，优化转化方法，开展目标基因的转化，去除筛选阶段对转化效率的影响，提高转化效率。（待开展）
4.制备油菜诱变体系，获得产量更高、适应性更强的新品种。（待开展）
任务周期：2年
经费预算：
1.小孢子培养筛选培养基、激素组合和浓度实验：60,000元
2.复杂性激素组合和浓度比对实验：80,000元
3.油菜胚状体转化体系构建与优化：120,000元
4.油菜诱变体系制备与筛选：140,000元
5.实验室常规费用：100,000元
总计：500,000元
参考文献：
1.郭凌云，牛志军，刘劲枫等.显微注射草酰乙酸诱导花粉小孢子发育的油菜诱导体系构建[J].植物生理学报，2016.
2.刘奓，马天琳，尹玲媛等.小孢子胚状体的分化及初步应用[J].植物生理学报，1995.
3.杨健，曹建辉，田宏等.油菜高效再生体系的建立与遗传转化[J].谷物学报，2010.
4.魏凤华，王虎雄，张欢等.利用生物技术实现油菜良种选育与品种改良[J].西北植物学报，2015.