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Skp1蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的功能研究的任务书 任务书: 1.背景介绍 Skp1是一种与蛋白质降解相关的基本组成部分,它通常作为F-box蛋白、Cullin和RING指结构域蛋白的适配器分子,参与了ubiquitinE3连接酶的形成和功能调节。Skp1的调节作用在许多生理过程中都被证明是必不可少的,包括早期胚胎发育。因此,本研究旨在探索Skp1在小鼠早期胚胎发育过程中的功能。 2.研究目的 本研究的目的是通过建立Skp1基因敲除小鼠模型以及在小鼠胚胎中特定时间点过量表达Skp1的技术,研究Skp1对小鼠早期胚胎发育的影响,并初步探索其作用机制。 3.研究内容 (1)构建Skp1基因敲除小鼠模型 利用CRISPR/Cas9技术靶向Skp1基因,构建Skp1基因敲除的小鼠模型。通过PCR、Westernblotting等方法鉴定敲除效果。 (2)Skp1在小鼠中的特定时间点过量表达 采用microinjection方法将Skp1基因质粒注射进小鼠受精卵中,以区分受精卵内外表达的Skp1。通过RNA和蛋白质分析确定Skp1重组表达和生物学活性。 (3)研究Skp1对小鼠早期胚胎发育的影响 评估Skp1基因敲除小鼠模型和Skp1过量表达小鼠模型中胚胎发育的差异,通过光学显微镜、电子显微镜、实时荧光定量PCR、RNA-seq等技术分析其影响胚胎发育的分子机制。 4.研究意义 本研究将有助于深入了解Skp1在小鼠早期胚胎发育中的作用机制,为阐述胚胎发育过程中蛋白质降解调节的分子机制提供新的理论基础。对于理解生殖生物学和疾病发病机制也具有重要意义。