产糖化酶根霉属分离及酶学性质研究.doc

产糖化酶根霉的分离以及酶学性质的初步研究**
孔维锐，郭福宗，周胜，寸跃芳，唐湘华*
（云南师范大学生命科学学院，云南昆明650500）
【摘要】：从五粮液酒厂周边采集而来的土样中分离出六株产糖化酶且酶活较高的菌株，选取酶活最高的一株K-1 为出发菌，进行发酵实验，并测得糖化酶在50-55℃酶活较高，最适作用温度为55℃。且糖化酶在pH值5.5-6之间酶活力较高。酶对玉米粉、小麦粉、木薯粉、苦荞粉、黄豆粉有较强的液化能力，其中对玉米粉的糖化能力最强。在酶的动力学实验中测得Km=1.446mg/ml，Vm=0.269mg/ml.min。
关键词：根霉;糖化酶;酶学性质
StudyinseparationofRhizopusandglucoamylasecharacters
KongWeirui,GuoFuzong,ZhouSheng,CunYuefang,TangXianghua*
(YunnanNormalUniversity,Schooloflifescience,Kunming650500,China)
Abstract:6strainsthatwereisolatedfromsoilaroungWuliangyebrewerycouldproduceglucoamylaseandhavehigherenzymeactivity.Theonewhichhasthehighestacitvitywasselectedtobethestartingbacteriatoferment.Theenzymeacitvityofglucoamylaseishigherbetween50to55℃andtheoptimaltemperatureis55℃.TheenzymeactivityofglucoamylaseishigherbetweenpH5.5-6.theenzymecanliquefycornflour,wheatflour,tapiocastarch,buckwheatpowder,soybeanmealstrongly.Andtheenzymecansaccharizecornflourbetter.Thekineticsexperimentoftheenzymeshowedussomedata:Km=1.446mg/ml,Vm=0.269mg/ml*min.
Keywords:Rhizopus;Glucoamylase;glucoamylasecharacters
根霉细胞中不仅含有丰富的糖化酶，还含有一定的酒化酶系，可以边糖化边酒化同时含有能产生曲酒香味前体物质的酶系[1]。而且根霉比曲霉更具有糖化力高，适应性强、繁殖速度快等特点。生长速度快、对温度、湿度、营养的适应范围很广。
糖化酶是淀粉糖化酶（GlucoamylaseEC.3.2.1.3）的简称，又称为γ-淀粉酶（γ-amylase），糖化酶能从淀粉非还原性末端依次切下一个葡萄糖单位，将淀粉水解为葡萄糖。因此，它被广泛地应用于酒精、白酒酿造、抗生素、氨基酸、
**基金项目：2011年“云南省大学生创新性实验计划项目-宜宾五粮液酒厂周边根霉产糖化酶能力筛选及其固体发酵条件优化”，项目编号：KXX2011-12-284。
作者简介：孔维锐，（1987-），男，云南曲靖人，在读本科，生物技术专业。
*通讯作者：唐湘华，讲师，生物工程专业，云南师范大学呈贡校区生科院2005#，邮编：650500，E-mail:[e-mail].
有机酸、甘油、纺织、日化等工生物业中[2]，是我国最大的工业酶制剂产品[3]，多年来对糖化酶的研究主要集中于提高菌株的产酶能力[3-5]改善发酵条件[6]。本实验的目的就是筛选复合酶系协同作用强的菌种，供葡萄糖生产或酿酒工业应用。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1土样来自：宜宾五粮液酒厂周边土壤
1.1.2主要的药品与试剂：无菌水、3,5-二硝基水杨酸(DNS)[7]、2%可溶性淀粉溶液，pH=4.6乙酸-乙酸钠溶液[8]。生长因子：FeSO4(0.01％)、KCl(0.05％)、MgSO4(0.05％)、(NH4)2SO4、NH4C1、KNO3、NaNO3、NH4NO3。
1.1.3部分仪器及设备：高速冷冻离心机（飞鸽牌），UV-2000紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），超净工作台等。
1.1.4培养基：分离培养基：可溶性淀粉0.5g，蛋白胨0.5g，酵母膏0.5g，KH2PO40.05g，MgSO4•7H2O0.01g，CaCl2•2H2O0.05g，琼脂2.5g，pH为5.0。0.1Mpa，121℃条件下灭菌30min，冷却至约50℃，倒5～6块