ESA和STAg鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答的任务书.docx

ESA和STAg鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答的任务书
任务目的：
本任务旨在评估ESA和STAg通过鼻内免疫诱导小鼠对弓形虫感染的保护性免疫应答，以期为开发弓形虫疫苗提供实验依据。
任务步骤：
1.实验动物：选用6-8周龄的雄性BALB/c小鼠。
2.抗原制备：
（1）ESA制备：将弓形虫原虫培养在人类AB型血浆中，收集滴虫并进行洗涤。然后冻干滴虫并在70°C干燥24小时，再进行氯仿提取并进行洗涤、纯化和浓缩，最后在PBS中重新悬浮得到ESA。
（2）STAg制备：将弓形虫蛋白质提取液经纯化和浓缩得到STAg。
3.鼻内免疫：将小鼠随机分为三组，每组10只。分别用PBS、ESA和STAg制备的抗原进行鼻内免疫，每只小鼠每次用10μl液体进行免疫，免疫分别在第0、14、28天进行。
4.消毒：免疫前后鼻孔口腔部位应进行消毒处理，避免干扰免疫过程。
5.采血：在免疫后的第35天采集小鼠血清用于后续的检测。
6.弓形虫感染：在免疫3周后，用100个Toxoplasmagondii滴虫口服感染小鼠。
7.细胞因子检测：在感染后的第7天，采集小鼠脾脏进行细胞因子检测，包括IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α等。
8.分泌型IgA和IgG测定：采用ELISA检测小鼠血清中的IgA和IgG水平，包括ESA和STAg的特异性抗体。
9.存活率观察：观察小鼠存活率，记录每组小鼠的死亡情况。
任务成果：
本任务预期结果为，通过ESA和STAg鼻内免疫小鼠诱导产生特异性抗震和细胞因子，提高小鼠的抗弓形虫感染能力，从而为未来研发弓形虫疫苗提供实验依据。