一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108844802A(43)申请公布日2018.11.20(21)申请号201810657303.9(22)申请日2018.06.25(71)申请人孙鑫地址450000河南省郑州市金水区顺河路56号申请人李畅王基锋张广清蒋周莹胡彬彬韩芳芳黄亮(72)发明人孙鑫李畅王基锋张广清蒋周莹胡彬彬韩芳芳黄亮(74)专利代理机构郑州立格知识产权代理有限公司41126代理人田磊(51)Int.Cl.G01N1/30(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法(57)摘要本发明公开一种硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8-12%、媒染剂（铝盐）3-7%、氢氟酸0.1-0.5%，其余为去离子水。同时提供检测脏器组织的硅藻检验方法。本发明硅藻荧光染色液有助于硅藻形态的展现，硅藻中硅质被氢氟酸溶解，使胶质层暴露出来，媒染剂（铝盐）促使荧光素标记到胶质层上，在对应波长的荧光显微镜下观察，在紫外光的激发下，硅藻的轮廓清晰的表现出来。CN108844802ACN108844802A权利要求书1/1页1.一种硅藻荧光染色液，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8-12%、媒染剂3-7%、氢氟酸0.1-0.5%，其余为去离子水。2.如权利要求1所述的硅藻荧光染色液，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水；媒染剂为铝盐。3.采用权利要求1所述的硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将脏器组织硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，向待检组织涂片上滴加硅藻荧光染色液，于35-40°C下，保温15-30min，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min；2)向步骤1）干燥后的待检组织涂片滴加脱色液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，所述待检组织涂片上的消化液、硅藻荧光染色液与脱色液的体积用量比为（90-110）μl︰（90-110）μl︰（90-110）μl。4.如权利要求3所述的检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，步骤1）脏器组织为肺组织，向步骤2）干燥后的待检组织涂片滴加复染液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，得待检样品；复染液由以下重量百分比的组分组成：高锰酸钾1.5-2.5%、双氧水0.4-0.7%，其余为去离子水，所述待检组织涂片的消化液与复染液的体积用量比为（90-110）μl︰（90-110）μl。5.如权利要求4所述的检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，所述脱色液由以下重量百分比的组分组成：盐酸5-7%、乙醇75-85%，其余为去离子水。6.如权利要求1所述的检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，步骤1）待检组织涂片由以下方法制得：1）剪取脏器组织，然后依次加入无水乙醇和硝酸，溶解后，于60-70°C下，静置消化10-15h后，冷却至室温，分离出油脂，所述脏器组织、无水乙醇和硝酸的用量比为20g︰3ml︰50ml；2）步骤1）分离出油脂后，加入蒸馏水，于3800-4200r/min下，离心12-18min，弃上清液，混匀后重复加入蒸馏水、离心、弃上清液，直至上清液pH值为6.5-7.5，得消化液；3）取100μl步骤2）消化液涂于载玻片上，于40-70°C下，干燥4-6min，得待检组织涂片。7.如权利要求6所述的检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，所述脏器组织取自溺水尸体的肝、肾或肺组织。2CN108844802A说明书1/5页一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法技术领域[0001]本发明属于硅藻检验技术领域，具体涉及一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法。背景技术[0002]溺死是法医学实践中的常见案件类型，亦是法医学检验的难点问题之一。在检案实践中，判断水中尸体是生前入水溺死还是死后抛尸入水，以及落水地点等情况时，硅藻的实验室检查尤为重要。[0003]溺死尸体硅藻检验的相关研究主要集中于溺水尸体器官组织中是否存在硅藻、检出硅藻的种类等法医学关注的议题，但长期以来硅藻检验方法的研究进展较为缓慢，近年，随着生物科学领域技术方法的突飞猛进，硅藻检验方法又开始成为研究的热点之一。[0004]目前常用硅藻检验基本上可分为：基于形态学观察方法、基于DNA序列的分子种属鉴定方法、基于硅藻化学元素组成差异的鉴定方法等类型。[0005]硅藻种类繁多，共同特征是细胞壁中含有不易被破坏的含水硅酸盐成分，在浓酸中煮沸或高温烧灼均不会发生明显破坏，基于这一特征，通过对提取的器官组