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TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗株的初步构建的开题报告
摘要：本文介绍了一种基于TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体的疫苗株的构建。本研究旨在建立一种可行的重组疫苗，同时提高疫苗抗体的免疫力和保护能力。研究中采用了基因工程、细菌培养、PCR扩增、蛋白体外表达和动物免疫等多种实验技术方法，旨在验证沙门氏菌载体构建成功。
正文：
背景与研究意义：鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimurium）是引起人畜共患的肠道病原菌之一，其感染造成的伤害严重影响着人类生产和生活。基因重组技术为开发新型疫苗提供了一种强有力的手段，构建复合载体是一种常见的策略。目前，TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体已被广泛用于疫苗研究。
目的：为了探索沙门氏菌负载TGEVS基因的疫苗株的构建技术和免疫效价，本研究旨在通过基因工程技术构建TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗株，并进行初步检验。
方法：构建TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗株的步骤如下：
1.购买拟南芥TGA1硫酸盐还原酶2基因（trxA）基因克隆载体pET32a-trxA
2.通过PCR扩增获得TGEVS基因和沙门氏菌贝贝尼罗spiA基因的DNA片段
3.将PCR扩增产物进行酶切，得到TGEVS基因和spiA基因的目标片段
4.通过LigationPCR实现TGEVS基因和spiA基因融合，得到TGEVS-spiA-His（六倍体组氨酸标签）基因片段
5.将TGEVS-spiA-His基因片段亚克隆到载体pYA4469中，得到pYA4469-TGEVS-spiA-His重组质粒
6.采用化学法将重组质粒转化到鼠伤寒沙门氏菌中，验证转化效率，进行筛选
7.通过SDS-PAGE和Westernblot等方法验证重组沙门氏菌感染人体细胞的能力和膜蛋白表达情况
8.进行小鼠或其他动物的免疫实验，检测疫苗效力
预期结果：研究预期可以成功构建出TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体的疫苗株。通过SDS-PAGE、Westernblot以及动物实验证明同疫苗可以在小鼠体内引起免疫反应，提高免疫力，并且对鼠伤寒沙门氏菌感染具有一定的防护作用。
结论：本研究的目标是基于TGEVS基因减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体的疫苗株的构建，首先在体外实现了载体构建的成功，随后通过动物实验和其它细胞实验验证相应的免疫效力。研究结果表明，该重组疫苗株拥有一定的免疫效力和保护能力，可对鼠伤寒沙门氏菌感染具有较好的防护效果，为沙门氏菌感染方面的疾病控制提供了新的研究方向和技术支持。