荔枝特早熟性状相关候选基因黄酮醇合酶基因的初步研究的开题报告.docx

荔枝特早熟性状相关候选基因黄酮醇合酶基因的初步研究的开题报告
一、选题背景
荔枝是热带水果之一，因其口感香甜、肉质多汁，深受广大消费者的喜爱。特早熟的荔枝品种相比普通荔枝，可提前收获，市场竞争力更强。因此，特早熟荔枝的育种研究备受关注。目前，已有一些研究表明，黄酮醇合酶（flavonolsynthase,FLS）基因与果实的早熟性状具有一定关联。因此，本研究选择荔枝特早熟品种“玉华”为研究对象，初步探究其黄酮醇合酶基因的表达差异，为后续深入研究奠定基础。
二、研究目的
本研究旨在初步探究荔枝特早熟品种“玉华”的黄酮醇合酶基因表达差异，在分子水平上探究其可能与特早熟性状相关性。
三、研究内容和方法
1.植物材料准备
本研究选择荔枝特早熟品种“玉华”为试验材料，同时收集普通荔枝品种“桂圆”进行对照。从不同果实发育期的“玉华”果实中提取总RNA，进行RNA浓度检测和质量检测。将高质量的RNA作为RT-PCR反应的模板。
2.RT-PCR实验
选取黄酮醇合酶基因家族中的部分基因为目标基因进行扩增，扩增所用引物如下：
FLS1：
5’-TCCACAGACTGTTCCCGTTCAATC-3’
5’-ATTTTCCTCCAAAACTGTCTTGGT-3’
FLS2：
5’-CGGGCTGCCTGGATCGTAGAG-3’
5’-TGAGAGATGGAGGGTAGTGGAG-3’
FLS3：
5’-GGAGCATTGTAACAACTACAGG-3’
5’-CATCTAAAGAACCTACGCCACT-3’
FLS4：
5’-AATTATGTCCCTTGCCCATCT-3’
5’-AGCCACACGTTCACTGCTTTA-3’
将扩增后的产物通过染色体电泳的方式检查其在所期望的分子大小上是否有明显的带。将产物纯化并测序，检验其序列的准确性。
3.基因分析
利用伯朗法测定PCR扩增后的产物含量，进行相对定量分析，计算各扩增体系中的目标基因的表达量，并在组内、组间进行比较分析。
四、预期结果
本研究预期可以初步探究荔枝特早熟品种“玉华”的黄酮醇合酶基因表达差异，这也为后续探究这些基因在规模化实验中的功能和表达特性提供了基础。另外，对于荔枝特早熟性状的相关研究，本研究也为寻找遗传基础提供了一定的参考。
五、参考文献
1.ChenH,SongY,LiY,LiS,&MaF(2015)IdentificationofdifferentiallyexpressedgenesinLitchichinensisSonn.duringfruitabscissionundernaturallyoccurringethyleneandethephontreatmentsusingRNAsequencing.Frontiersinplantscience6:818.
2.DengYY,LiJQ,WuSF,ZhuYP,ChenYW,&HeFC(2006)Integratednrdatabaseinproteinannotationsystemanditslocalization.Computerengineering32(5):71-72.
3.HahnMG,BucheliE,&DarvillA(1989)Alteredbiosynthesisofglucuronoxylansinmutantplantsdeficientinglucuronosyltransferase-I.Theplantcell1(7):667-681.
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