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STAT6基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察的中期报告
概述
本研究旨在构建STAT6基因RNA干扰表达载体，并观察其在人类肝癌细胞株HepG2中的沉默效应。本中期报告介绍了目前的研究进展。
材料和方法
1.构建RNAi表达载体
通过PCR扩增STAT6基因背景序列，设计引物引入RNA干扰的靶向序列。将目的序列ligate到psiRNA-hH1-GFPzeoVector中，构建RNA干扰载体。
2.细胞培养与转染
使用DMEM培养HepG2细胞，将RNAi表达载体转染入细胞中，用荧光显微镜观察转染效果。
3.RNA提取和RT-qPCR
利用Trizol方法提取HepG2细胞中的总RNA，合成cDNA，使用实时荧光定量PCR测量STAT6mRNA水平。
结果
1.成功构建了含有STAT6基因RNA干扰序列的psiRNA-hH1-GFPzeoVector。
2.成功将RNAi表达载体转染至HepG2细胞，荧光显微镜观察到了GFP信号。
3.RT-qPCR结果显示，相较于对照组，RNAi转染组中STAT6mRNA水平下降了50%。
讨论
本研究成功构建了STAT6基因RNAi表达载体，并成功将其转染至HepG2细胞中观察其沉默效应。RT-qPCR结果显示，RNAi转染组中STAT6mRNA水平下降了50%。这表明该RNAi表达载体能够有效地干扰STAT6基因的表达。接下来的工作将继续研究RNAi表达载体在HepG2细胞中的稳定性、沉默效应的持续时间和靶向效应的特异性等问题。