RNA干扰对大鼠肝星状细胞COL1A1基因表达的影响的任务书.docx

RNA干扰对大鼠肝星状细胞COL1A1基因表达的影响的任务书
任务描述：
本任务需要探究RNA干扰对大鼠肝星状细胞（HSC）COL1A1基因表达的影响。COL1A1是编码胶原蛋白Iα1的基因，大量表达于成纤维细胞和HSC中，是机体维持肝脏结构稳定的重要分子。而在肝纤维化过程中，COL1A1的异常表达导致胶原的过度积累，从而加重肝脏纤维化程度。RNA干扰是利用RNA酶切机制破坏靶基因的基因沉默技术，已被广泛应用于基因功能研究和新药开发等领域。本任务就是要考察不同浓度的RNA干扰对大鼠肝星状细胞COL1A1基因表达的影响，为进一步探索肝纤维化的治疗提供实验依据。
任务步骤：
1.制备大鼠肝星状细胞（HSC）细胞：从SD大鼠取出肝组织，采用胶原酶-形成细胞-沉淀法分离HSC细胞。
2.确定RNA干扰浓度：将HSC细胞分成6组，分别添加0、10、20、30、40、50nM的siRNA，培养48h后，采用qPCR和Westernblot检测细胞中COL1A1的表达，比较各组之间的差异，确定最优的RNA干扰浓度。
3.建立COL1A1基因沉默模型：根据确定的RNA干扰浓度，选取最优条件进行COL1A1基因的沉默。对于沉默效果好的HSC细胞，继续进行后续实验。
4.检测细胞增殖：采用CCK-8试剂检测细胞增殖情况，比较RNA干扰组和对照组之间的差异。
5.分析细胞凋亡：通过TUNEL法和AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，比较RNA干扰组和对照组之间的差异。
6.测定胶原合成：利用ELISA法测定细胞培养液中胶原I和胶原Ⅲ的含量，比较RNA干扰组和对照组之间的差异。
7.评价基因表达：采用qPCR和Westernblot法检测细胞中COL1A1、COL1A2、α-SMA和TGF-β1等基因的表达水平，比较RNA干扰组和对照组之间的差异。
8.数据分析和讨论：对实验结果进行统计学分析和综合评价，并结合前人研究结果进行讨论和展望。
参考文献：
1.SungWK,etal.siRNAscanfunctionasmiRNAs.GenesDev.2008;22(20):2788-93.
2.LiG,etal.Morphologyandcollagensynthesisofrathepaticstellatecellsculturedinthree-dimensionallyprintedbioscaffoldswithdifferentporesizes.IntJClinExpMed.2018;11(5):5247-56.
3.HanX,etal.Over-expressionofcollagensVIandXIVisinvolvedinthedevelopmentofcoloncancer.BMCCancer.2018;18(1):151.