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HGF基因促进内皮祖细胞增殖的体外研究的中期报告
本研究旨在探索HGF基因对内皮祖细胞增殖的影响及其机制，为临床治疗提供新的思路。本中期报告主要介绍实验设计、实验方法和初步结果。
实验设计：
1.细胞来源：采用人脐静脉内皮细胞，经过第2代于体外培养至80%以上的稳定细胞。
2.细胞处理：将细胞分为四组，分别为HGF基因转染组、空载体组、阴性对照组和阳性对照组。
3.实验方案：分别采用MTT法和细胞计数法检测内皮祖细胞增殖情况，Westernblot和Real-timePCR检测相关蛋白和基因表达水平。
实验方法：
1.细胞培养：采用DMEM培养基，10%FBS和1%青霉素-链霉素。将细胞分为四组，分别在培养基中加入相应的载体DNA或HGF基因拷贝，细胞分别培养24小时、48小时和72小时。
2.细胞增殖测定：采用MTT法和细胞计数法，分别用于检测细胞增殖情况。
3.Westernblot：采用蛋白质电泳，检测内皮生长因子和相关信号转导通路蛋白表达水平。
4.Real-timePCR：采用SYBRGreenPCR方法，检测内皮细胞凋亡相关基因和增殖相关基因表达水平。
初步结果：
1.HGF基因转染组的内皮祖细胞增殖速度明显高于空载体组、阴性对照组和阳性对照组。
2.Westernblot检测结果显示，HGF基因转染组中，HGF和c-Met蛋白的表达水平明显增加，与其他组相比有显著差异。
3.Real-timePCR检测结果显示，HGF基因转染组内皮祖细胞中增殖相关基因（cyclinD1、PCNA）表达水平明显增加，而凋亡相关基因（Bcl2、Bax）表达水平减少，与其他组相比差异明显。
结论：
HGF基因能够促进内皮祖细胞的增殖，通过激活相关信号通路并调控增殖和凋亡相关基因的表达。这一发现为内皮细胞再生和治疗心血管疾病提供了新的思路和理论基础。