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会计学RNA链延伸的基本过程RNA链的延长,不是以恒定速度进行的RNA链延伸的暂停 链延伸的速度不是恒定的,在DNA的某些区域,转录速度减慢或停止,常发生在富含GC区。AstalledRNApolymerasecanbereleasedbycleavingthe3endofthetranscript.1、转录终止概述2、大肠杆菌的两类终止子终止子结构终止需要的DNA序列位于终止位点序列之前; RNA发夹结构的形成可能是必要的。依赖ρ因子的终止RhohasanN-terminalRNA-bindingdomainandaC-terminalATPasedomain. AhexamerintheformofagappedringbindsRNAalongtheexterioroftheN-terminaldomains.依赖ρ因子的终止子GC含量低,使延宕时间变短; 回文序列下游缺乏连续的A/U三、真核生物RNA转录的终止(2)RNA聚合酶Ⅱ终止位点的专一性可能不强,终止一般发生在产生成熟mRNA(专一序列切割处)3′端下游1000bp以外的位点上。终止位点二级结构的形成可能比具体的碱基序列更重要,可能需要一段富含AT的序列。(3)RNA聚合酶Ⅲ转录在RNA末端处终止。RNA末端富含GC序列中的寡聚T(4个以上)是终止信号,RNA聚合酶Ⅲ在此处终止转录。 除聚合酶Ⅲ本身外,似乎不需要其它蛋白质因子参与转录的终止。四、抗终止//2.依赖于蛋白质因子的转录抗终止Antiterminationextendsthetranscriptionunit五、原核生物与真核生物mRNA的特征比较1、转录发生的部位原核生物mRNA(1)许多是以多顺反子形式存在;(2)5′端无帽子结构;(3)3′端没有或只有较短的poly(A)。起始密码AUG上游7-12个核苷酸处有一被称为SD(Shine-Dalgarnosequence)的保守区,与16SrRNA3′端保守核苷酸反向互补。rRNA保守区:3′-UCCUCC-5′真核生物mRNA结构特征 5′Gppp+pppApNpNp…5′GpppApNpNp…+PP+P 帽子覆盖了mRNA的5′端,它可在几个位点被甲基化mRNA5′末端帽子特征的生物学功能:高等真核生物(除组蛋白基因)的mRNA,3′端具有poly(A)尾巴,长度40-200bp。生物学功能:I:保持mRNA的稳定性,防止被降解;II:与翻译起始有关。应用一:★Poly(A)用来从总RNA中分离mRNA可设计寡聚Oligo(dT)片段合成cDNA(4)真核生物mRNA中常含有内含子3.生命周期六、转录后加工(一)tRNA的加工 (二)rRNA的加工 (三)mRNA的加工 (一)tRNA的加工tRNA加工时需要多种核酸酶参与: 如:RNaseD、E、F和P等,RNaseP主要在tRNA的5′起作用。它由蛋白质和RNA组成,它不识别特殊序列,只识别二级结构。 RNaseD主要负责切除3′序列。 tRNA核苷酸转移酶,催化3′末端的CCA的生成。(1)识别发夹结构的内切核酸酶切断RNA链; (2)RNAaseD识别CCA末端序列,一个一个除去七个核苷酸。 (3)内切核酸酶P切断RNA,形成5′末端; (4)RNAaseD除去3′末端的二个核苷酸,形成3′-OH末端。缺-CCA的tRNA要用tRNA核酸转移酶加-CCA。 (5)修饰:通过甲基化酶,硫醇酶,假 尿嘧啶核苷化酶等进行修饰,如氨 基酸臂的4-硫尿苷,D臂的2甲基鸟苷,TψC臂的假尿 苷(ψ)和反密码子环上的2异戊腺苷。/2.真核的tRNA的加工/真核tRNA内含子的特点:真核tRNA内含子切除的特点:(二)rRNA的加工/2.真核生物rRNA的加工 45S前体rRNA形成后立刻与蛋白质结合,加工发生在核糖体上,而不是游离的rRNA上。 (1)切除5′端的前导序列; (2)从45S的中间产物中先切下18S的片段。 /(三)前体mRNA转录后的加工mRNA前体分子的加工主要是真核mRNA,原核的mRNA一般不经过加工。 1.真核mRNA前体的加工 核内不均一RNA(heterogenousnuclearRNA,hnRNA)平均分子长度为8-10kb(2Kb-14kb)左右。hnRNA是mRNA的前体,比mRNA的平均长度(1.8-2kb)要大4倍多。2、真核mRNA的加工步骤 一般要经过四步: (1)5′加帽(capping); (2)3′加尾(tailing):(50-200bp) (3)内含子的剪接(splicing) (4)修饰:对某些碱基进行甲基化。 (5)编辑(editing)(2)加尾B、剪切因子(CF)AAUAAA处下游15-30bp处剪切RNA; C、末端腺苷转移酶[p