红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚psy基因的分离.doc

正文：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离

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本科生毕业设计（论文）

题目：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离
学院：化学与生命科学学院
毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明

原创性声明
本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。
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使用授权说明

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目录

摘要 1
英文摘要 1
1引言 1
2材料 2
2.1植物材料 2
2.2实验试剂 2
2.3主要仪器和设备 2
3方法 3
3.1总RNA提取 3
3.1.1常用试剂配制 3
3.1.2器具处理与准备 3
3.1.3提取RNA 3
3.2RNA的纯化 4
3.3RNA提取质量与含量检测 4
3.3.1总RNA的电泳分析 4
3.3.2总RNA含量与纯度测定 4
3.4cDNA链合成 5
3.4.1cDNA一链的合成 5
3.4.2cDNA第二链合成 5
3.5基因的克隆及序列分析 6
3.5.1基因的克隆 6
3.5.2割胶回收 6
3.5.3T-载体连接 6
4结果与分析 7
4.1RNA电泳结果分析 7
4.2RNA紫外分光光度计测定结果分析 7
4.3纯化后RNA电泳结果分析 8
4.4合成cDNA电泳结果分析 8
4.5PSY基因的克隆 9
4.6序列性分析 9
5讨论 12
参考文献 14
致谢词 16

红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离
化学与生命科学学院生物科学专业付文佳（05260204）
指导老师：杨莉（副教授）
摘要：采用改良Bugos法提取红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚成熟果实果肉RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI网站公布的PSY基因全序列设计引物，采用高保真Taq聚合酶进行PCR扩增，将扩增产物连接到pUCm-T载体，转化至大肠杆菌DH5α，并送公司测序。比较发现，红肉蜜柚和琯溪蜜柚果肉PSY基因全长均为1317bp，编码439个氨基酸，序列比对结果显示两者PSY基因与柑桔属PSY基因同源性都相对较高，同源性最高达99%。
关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；PSY基因；基因分离；序列分析
IsolatingPSYGenefromRed-fleshedSweetPomeloandItsParentGuanxiSweetPummelo
FUWen-jiaDirector:YANGLi
(CollegeofChemistryandLifeScience,ZhejiangNormalUniversity,052No.04)
Abstract：ThetotalRNAwasextractedfromtheripefruitofRed-fleshedsweetpomeloandGuanxisweetpomelousingimprovedBugosRNAextractionmethod,thenweresynthesisedcDNAbyreversetranscriptasekit.Atthesametime,wedesignedprimersforPSYgenesequencesaccordingtotheinformationPSYgenesequencesonNCBI,high-fidelityTaqpolymerasewereusedforPCRamplificationandcDNAasthetemplate.Finally,thePCRproductswereconnectedtopUCm-Tvector,thensequencedandanalyzedthesequences.SequenceanalysisindicatedthatthecDNAfragmentwas1317bp,encodinga439aminoacidproteinandhaved99%identitywiththoseofothercitrusinthehighestlevel.Theresearchingmaybeessentialforthemolecμ