养殖水体中高效氨氮降解菌的分离与鉴定.pdf

第24卷第lO期水产科学Vo1．24No．10
2005年1O月FISHERIESSCIENCEOct．2o05

养殖水体中高效氨氮降解菌的分离与鉴定

侯颖，一，孙军德2，徐建强．一，徐超蕾2
(1．河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳471003；2．沈阳农业大学，辽宁沈阳110161)

摘要：以(NH4)zso4为惟一氮源的选择性培养基，从养鱼池水中分离筛选到l株高效氨氮降解菌x2。当NI-h一N
初始质量浓度为50mg／L时，该菌株在24h内的氨氮降解率>95％，并具有硝酸还原和亚硝酸还原能力。初步鉴定
该菌株为巨大芽孢杆菌(gaciEusmegaterium)。
关键词：养殖水体；氨氮；降解；巨大芽孢杆菌
中图分类号：$917．1文献标识码：A文章编号：1003．111l(2~05)10-0022473

随着水产养殖集约化的发展，养殖水体的污染问题越×10～、1．0×10稀释液各0．1ml，在分离培养基上涂乎板，
来越严重，特别是氨氮污染。近几年来，不断发生养殖生物置28℃培养，观察氨氮降解菌的生长情况。选取菌落大、数
氨氮中毒的事件，给水产养殖业带来了严重的经济损失L1]。量多的氨氮降解菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，进行
如何解决养殖水体中的氨氮污染问题，已成为净化养殖水活化培养。
质的研究热点。就目前来看，常用处理养殖水体氨氮污染1．4高效氨氮降解菌的筛选
及防治养殖生物氨氮中毒的方法主要有物理、化学和生物3吸取l0ITl1活化菌液，转入离心管中，3000r／rnin离心10
种L2】。传统的物理及化学方法虽然见效快，但投入较大且rnin，去除上清液；再用10ITl1生理盐水洗涤沉淀，混匀，再次
容易引起二次污染3，而生物法则被认为是未来最有潜力、离心；如此重复3次，以除去菌种活化过程中产生的氨氮。
最有发展前景的方法，因为生物法在调节养殖水体水质的最后用10ITl1生理盐水洗下沉淀，接入装有100ml筛选培养
同时不会造成二次污染，还对养殖水体中的生态平衡起到基的三角瓶中，28℃摇床培养24h。吸取10ITl1培养液于

一定作用。本文旨在通过对养鱼池塘中氨氮降解菌的分离3000r／rn／n下离心10min，去除菌体。用靛酚蓝分光光度
筛选，获得能降解养殖水体氨氮的高效菌株。为养殖水体的法【4测定上清液中氨氮含量，同时测定未接菌的培养基中
氨氮污染问题寻求一种更为安全有效的防治措施。的初始氨氮含量，计算各个氨氮降解菌的降解率。选取降
1材料与方法解能力最强的氨氮降解菌作进一步研究。
1．1菌种来源1．5菌株最大吸收波长的测定
本试验所分离到的高效氨氮降解菌来自沈阳市东陵区取1．4中得到的高效菌株的1824h牛肉膏蛋白胨培
后陵养鱼池塘。养液在380—600nln的波长下以未接种的培养基为空白测
1．2培养基定其OD值，以波长为横坐标，以OD值为纵坐标作图，找出
富集培养基：葡萄糖5．0g，(Nil,)2SO42．0g，NaG2．0g，高效氨氮降解菌的最大吸收波长。
FeSO4‘7H2O0．4g，K2HPO41．0g，Mg~)4。7H2O0．5g，水10001．6菌生长量及氨氮浓度随时间的变化
将高效氨氮降解菌接入筛选培养基中，28。C摇床培养24
ITl1，pH7．2—7，4；分离培养基：富集培养基加2％琼脂；菌种
h，自接种后开始每隔2h取样一次，每次取l0Tnl，先在其最
活化培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基；筛选培养基：葡萄
糖5．0g，(NH4)2sO40．25g，NaC11．0g，K2HPO40．5g，MgSO4‘大吸收波长下测定其OD值，然后离心取上清液测定其中氨
氮含量，以时间为横坐标，OD值与氨氮含量为纵坐标作图。
7H2O0．25g，水1000ml，pH7．2—7．4，其中氨氮含量约为50
1．7高效氨氮降解菌的初步鉴定
mg／L。培养基在121℃条件下灭菌15min。
根据《常见细菌系统鉴定手册》】对高效氨氮降解菌的
1．3氨氮降解菌的富集分离
形态特征、生理生化特征等方面进行了初步鉴定。
取10Tnl水样，接入装有100ml富集培养基的250rnl三
角瓶中，于28℃下摇床培养7d，且每隔1d向其中加入5％2结果与讨论
的(N地)2so4溶液1nd，以淘汰不能利用NH4的微生物。2．1氨氮降解菌的富集分离
吸取富集培养液1ml，用无菌水制成1．0×10～，1．0×10～，通过富集分离，从所采水样中共分离到5株生长良好，
1．0×10一，⋯⋯1．0×10—的稀释液，分别吸取1．0×10～、1．0且菌落直径>5inm的氨氮降解菌，分别编号为)(1、x2、x3、

收稿日期：2O04一ll一21；修回日期：2005—01—06．
作者简介：侯土颤壤(与19环7§境微)女生，