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海带多糖的含量测定方法正确性研究
【摘要】目的探索正确测定海带多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸法，按照不同糖溶液配制标准液在485nm处测定多糖含量。结果按照多糖中褐藻糖与半乳糖比例为标准测得多糖含量为%，介于两种组成单糖测定结果之间。结论按照多糖中单糖组成比例为标准测定多糖含量具有可比性，可用于海带多糖含量测定。【关键词】海带多糖苯酚硫酸法Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.MethodsWeusedthemethodofvitriliccolorimetry,anddetectionwavelengthwas485contentofpolysaccharideswiththemethodwhichwasaccordingtothecomposingsugarswas%.ConclusionThismethodcanbeusedtodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.Keywords：Laminariajaponica;Polysaccharides;Phenol-vitrioliccolorimetry海带Laminariajaponica，又名纶布、昆布、江白菜，是多年生大型食用藻类。藻体为长条扁平叶状体，褐绿色，有两条纵沟贯穿于叶片中部，形成中部带，一般长～3m，宽15～25cm，最长者可达6m，宽可达50cm。海带生于海边低潮线下2m深度的岩石上，人工养殖生长在绳索或竹材上，是我国、日本、朝鲜等东方人喜欢食用的经济藻类。我国海带养殖已发展成大规模产业，从辽宁一直到广东沿海，产量约占世界海藻的50％，居世界第1位。海带成本低廉，功能众多，在有益物质提取和食品加工中作用明显，市场潜力很大［1］。海带富含多种功能性成分，如碘、甘露醇、维生素A、维生素B、维生素C、牛磺酸、海带多糖等，其食用和药用价值很早即为世人所关注［2］。研究表明，海带对外界恶劣环境所表现出来的抗逆耐受能力与它们所含的海带多糖有直接关系，海带多糖还具有稳定细胞膜和蛋白质结构的功能。海带多糖在医药、食品、化妆品、农业等方面也具有广阔的应用前景［3］。我国在对海带多糖的研究中所用的实验材料多是粗制品，缺乏纯化和组成鉴定过程，对海带的利用也局限于提取褐藻酸、甘露醇等。许多文献中，测定海带多糖时用葡萄糖或其组成的主要单褐藻糖作标准溶液，造成结果与真实值相差太大。本文采用水提醇沉的方法对海带多糖的进行提取、纯化，并采用按照组成样品的单糖比例配制标准液的测定方法对其多糖含量进行测定，对几种测定方法进行比较和准确性评价。1材料与仪器海带采自青岛沙子口，经鉴定为Laminariajaponica；95％乙醇、浓硫酸、六水合氯化镁、氢氧化钠、三氟乙酸、盐酸羟胺等均为国产分析纯；5%苯酚；L－褐藻糖；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均购自于上海试剂二厂；肌醇。高压锅；FA1004电子天平；722型分光光度计；瑞士BüCHIR－114型旋转蒸发仪；东京理化EYELAFD－5N型真空冷冻干燥机；电热恒温水浴锅；TDL－40B离心机；HP5890Ⅱ气相色谱仪，氢火焰离子化检测器。2方法与结果海带多糖样品的制备采用水提醇沉法提取纯化海带多糖样品。样品组成单糖的确定气相色谱条件SGEAC225mm×30m弹性石英毛细管柱；柱温215℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流比100∶1；高纯氮气为载气，流速1ml/min。标准糖样衍生物的制备分别称取4～6mg的L-褐藻糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、葡萄糖、L-鼠李糖以及1mg的肌醇置1ml的离心管中，加入10mg盐酸羟胺和ml的吡啶，在90℃水浴中加热反应30min，并不时振荡。取出后冷却至室温，加入ml的乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，并不时振荡，冷却后即得适于气相色谱分析的标准单糖衍生物［4］。样品水解称取多糖样品各1份，分别置于10ml水解管中，加10ml2mol/L的三氟乙酸(TFA)溶液溶解，封管，100℃水浴中水解4h,减压浓缩至干。组成样品单糖的确定根据色谱图，确定组成样品的单糖为:鼠李糖、褐藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，但褐藻糖和半乳糖含量远多于其它几种单糖，两者含量比例为∶1。结果见图1～2。多糖含量测定标准曲线的绘制准确称取葡萄糖、L-褐藻糖和D-半乳糖各50mg，分别溶于容量瓶中配成100ml溶液。按褐藻糖与半乳糖比例:1，从两个标准溶液中各取ml和ml形成混合溶液为标准液。分别精密吸取葡萄糖标准溶液、褐藻