酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究.pdf

固2010，Vo1．27No．4亿与生物互程
Chemistry&Bioengineering

酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究

王玉敏。齐红丽
(1．阜新市高等专科学校，辽宁阜新123000；
2．天津农学院水产科学系，天津300384)

摘要：以小分子肽得率为考察指标，研究了由枯草杆菌AS1．398中性蛋白酶制备大豆低分子肽的工艺条件。通
过单因素实验和正交实验确定AS1．398中性蛋白酶酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的最佳条件为：底物浓度6、温
度45~C、加酶量17000U·g-。、pH值7．5。检测了在最佳条件下水解不同时间所得酶解液的活性，发现水解2．5h的
大豆肽液的抗氧化活性最强。
关键词：大豆肽；酶解；水解度
中图分类号：Q556TS201．2文献标识码：A文章编号：1672～5425(2010)04—0064—03

大豆肽不仅较大豆蛋白更易于消化吸收，还具有
2结果与讨论
很强的抗氧化、抗衰老、降血压、减肥等功效，且成本低
廉，已成为研究者关注的热点之一。动物试验证明，2．1加酶量对水解度的影响(图1)
*
小分子肽(由2～4个氨基酸组成的寡肽)比蛋白质和
：20
氨基酸更容易被消化吸收。以往对大豆肽的研究往往
只注重大豆蛋白的酶解率，而对小分子肽得率相对忽
略，这使得研究结果很难真正有效。
AS1．398中性蛋白酶是一种优质的中性蛋白酶，
相对于木瓜蛋白酶、胰蛋白酶具有更强的水解能力引。

作者在此以小分子肽得率为水解度考察指标，对40008000l20001600020000
AS1．398中性蛋白酶的特性进行了研究。加酶量，U·g

图1加酶量对水解度的影响
1实验
Fig．1EffectofenzymeamountonDH

1．1材料、试剂与仪器
由图1可知，水解度随着加酶量的增加而上升；当
脱脂大豆粕(经凯氏定氮法测其蛋白质含量为
加酶量达到12000U·g后，上升趋缓。这是因为底
85．6)，辽宁鑫吉粮油加工公司。
物浓度一定时，底物的转化率取决于酶的量，酶分子越
枯草杆菌AS1．398中性蛋白酶(酶活为5万U·
多，与蛋白质分子肽链的接触几率越大，则底物转化为
g)，无锡雪梅酶制剂科技有限公司。产物肽也就相应增多，水解度升高；但当加酶量比较高
紫外可见分光光度计，离心分离机，pH酸度计，时，底物的相对浓度较小，已经被酶饱和，有一部分酶分
凯氏定氮仪，增力电动搅拌器，电热恒温水浴锅，恒温
子将不能与大豆蛋白质分子结合，导致水解度上升趋
干燥箱，九阳料理机，微量滴定管，电子分析天平等。缓。综合考虑，确定适宜的加酶量为16000U·g_。。
1．2方法2．2底物浓度对水解度的影响(图2)
原料一打碎一过筛一调底物浓度一预处理从图2可以看出，大豆蛋白的浓度对水解度影响
一调温度一调pH值一加酶一水解一灭酶。不大。当底物浓度较低时，酶与底物结合几率较小，反
1．3水解度(以小分子肽得率计)测定应速度较慢，导致水解度较低；适当增加底物浓度有利
水解度(DH)测定依据pH—stat法[4]。

收稿时期：2010—01—12
作者简介：王玉敏(1969一)，女，山东人，讲师，研究方向：生物化学与分子生物学。
王玉敏等：酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究／2010年■4期固

从图4可以看出，AS1．398蛋白酶在微碱性条件
下水解大豆蛋白的效果最好。因此，选择适宜的pH
值为7．5。
苫；宅
2．5水解时间对水解度的影响(图5】
涟
*

底物浓厦／％
图2底物浓度对水解度的影响

Fig．2EffectofsubstrateconcentrationonDH

于反应速度的加快，相应水解度升高；但底物浓度达
6以后，随着底物浓度的进一步增加，水解度反而下水解时间／h
降。因此，确定适宜的大豆蛋白浓度为6。图5水解时间对水解度的影响
Fig．5EffectofhydrolysistimeonDH
2．3温度对水解度的影响(图3)
从图5可以看出，水解度随水解时间的延长呈上
升趋势，尤其在最初的2h内升幅显著，之后上升趋
缓。这是因为蛋白酶具有专一性，随着水解时间延长，
瑙
篷蛋白酶可水解的肽键逐渐减少，同时蛋白酶活力以半
苗
衰期方式下降。但考虑原料利用的问题，选择适宜的
水解时间为3h。
2．6酶水解最佳工艺条件的确定
温度／℃通过单因素实验，选择加酶量、温度、底物浓度、pH
图3温度对水解度的影响值为考察因素，以水解度为考察指标，水解时间为3h，
Fig．3EffectoftemperatureonDH
进行(4。)正交实验，以确定大豆蛋白的最佳酶解条
从图3可以看出，温度对AS1．398中性蛋白酶水件。正交实验因素与水平见表1，结果与分析见表2。

解大豆蛋白的影响十分显著。水解度