Ig与基因工程抗体.ppt

一、Ig基本结构及其功能
功能区：链内二硫键二、Ig的水解片段：
6单抗的特点：
特异性高
异源蛋白----HAMA的产生
#HAMA：humananti-mouseantibody四、基因工程抗体
鼠单抗的人源化改造
小分子抗体
抗体融合蛋白
抗体库技术
转基因小鼠（一）鼠单抗的人源化改造
恒定区人源化
可变区人源化
表位导向选择1、恒定区人源化----人鼠嵌合抗体(humanmousechimericAb)
人鼠嵌合抗体：
最大程度的保留了鼠抗的特异性和亲和力
异源性较高
主要用于肿瘤的治疗：
1998首例人鼠嵌合抗体上市2、可变区人源化
人改型抗体(reshapedantibody)
表面残基人源化(venneering，镶边)改型抗体----CDR移植抗体：
仅保留鼠抗的抗原决定簇互补区（CDR）表面残基人源化3、表位导向选择法(epitopeguidedselection)----通过抗体库技术进行人源化鼠-人抗体库人源化抗体的特点（比嵌合抗体）：应用（二）小分子抗体和抗体融合蛋白
Fab段：
重链V区、CH1区与L段
通过链间二硫键连接
1/3IgG
单价结合能力
木瓜蛋白酶水解
表达载体+E.coli等表达Fv段：
抗体中保留了抗原结合部位
的最小片段
VL/VH非共价连接
表达载体，E.coli等表达DsFv(二硫键固定的Fv段）

通过点突变，在VL、VH间引入Cys，形成链间二硫键结合能力及稳定性增强
单链抗体（ScFv：singlechainFv）双链抗体----diabody双价双特异性抗体—bispecificantibody
在双链抗体的两端引入不同的抗原结合位点
在肿瘤的诊断和导向治疗中有广泛应用前景小分子抗体的优点与应用
优点：分子量小，穿透力强
抗原性低
体内半衰期短
可在原核表达，易于基因工程操作应用：导向治疗
疾病诊断
（三）噬菌体抗体库----利用噬菌体表面表达技术制备完全人源化的抗体
噬菌体表面展示技术（phagesurface
display)：
——用噬菌体载体将抗体基因（Fab、ScFv）与噬菌体编码的外壳蛋白融合，并展现在单链噬菌体表面的技术。
该噬菌体抗体即可特异性识别抗原，又能感染宿主菌再扩增。
噬菌体抗体库技术的发展，依赖于三项技术PCR扩增：抗体库—ScFv,Fab基因噬菌体抗体库（四）转基因鼠（XenomouseII）
1997年美国Abgenix及CellGenesye公司
人Ig轻、重链基因的1.8MbDNA转到只身Ig位点已灭活的小鼠基因组中，制备携带人Ig基因的转基因鼠三、Ig多样性的遗传机制
（一）Ig多样性遗传机制的揭秘
利根川：
1976：抗体基因在个体发育过程中有重组
1978：测定L链DNA序列，发现内含子
1979：测定H链DNA序列，发现J区
1980：证明H链中存在D区，证实有体细胞突变
1983：Nature”抗体多样性的体细胞重组“
-------1987年获诺贝尔奖
（二）Ig的编码基因
轻链编码基因：V-J-C
重链编码基因：V-D-J-C（三）Ig多样性的遗传机制
1、Ig基因片段组合多样性：V-J/V-D-J
2、基因片段连接位置与连接插入多样化
3、抗体基因的体细胞突变轻链重排重链重排