家兔尿量及尿中钠,氯离子含量的影响.doc

实验九利尿药对麻醉家兔尿量及尿中钠、氯离子含量的影响
【目的和原理】
学习急性利尿的实验方法，观察呋塞米对麻醉兔的利尿作用；学习测定尿液中钠离子和氯离子的方法。
尿液中的钠离子与醋酸铀镁试剂作用,被沉淀为醋酸铀镁,然后以亚铁氰化钾和试剂中剩余的醋酸铀作用,使成形棕红色的亚铁氰化铀。尿液中钠的含量越多,剩余的醋酸铀越少,显色越淡。反之,钠的含量越少,剩余的醋酸铀越多,则显色越深。故从剩余的醋酸铀量,可间接计算出钠的含量反应式如下：
ＮaCl+3(UO2)(CH3COO)2+Mg(CHCOO)2+CHCOOH
—→(UO2)3MgNa(CH3COO)9+HCl
2(UO2)(CH3COO)2+K4〔Fe(CN)6〕
—→(UO2)2〔Fe(CN)6〕+4CH3COOK棕红色
用硝酸银试剂将尿液中的氯离子沉淀为氯化银。如硝酸银略有过量，便与铬酸银作用，成形桔红色的铬酸银。其反应式如下：
NaCl+AgN03→AgCl↓+NaN03
2AgN03+K2Cr04→AgCrO4↓+2KN03
【实验对象】家兔,1.5～2.5kg
一．家兔尿量的测定
【实验药品】25%乌拉坦、1%呋塞米
【实验器材】兔手术台、量筒、注射器、手术器械
【实验方法】
1.水负荷：灌胃给与自来水40ml/kg，避免灌至气管。
2.麻醉：耳缘缓慢i.v.25%乌拉坦4ml/kg，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。
3.手术：背位固定家兔，剪去下腹部被毛，于耻骨联合上方切开皮肤约4～5cm，并沿腹白线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区作荷包缝合后行膀胱插管，在插管前要将插管里充满生理盐水。
4.记录每2min的正常尿量，连续记录10min。
5.耳缘静脉注射1%呋塞米4mg/0.4ml/kg，记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min的尿量（每2min的尿量）
【实验结果】结果汇总，计算不同时间尿量的均值，以尿量毫升数为纵坐标，给药后时间为横坐标作图。

二．尿液中钠离子和氯离子的含量测定
测定体液中的钠离子以火焰光度法为最简便可靠,在没有火焰光度计的场合,也可用醋酸铀镁比色法来进行。测定体液中的氮离子则多用银滴定法。
(一)尿中钠离子的醋酸铀镁比色测定法
【实验试剂】
1.醋酸铀镁试剂：取醋酸铀（U2(CH3COO)2·2H2O）4g、醋酸镁（Ｍg(CH3COO)2·4H2O）15g、冰醋酸15ml、加蒸镏水75ml，加热溶解，并煮沸2分钟。放冷后加蒸镏水至100ml,再加无水乙醇至500ml，于冰箱中过夜。除去底层的微量沉淀，将上清液贮存于棕色试剂瓶中，置冰箱中备用。
2.1%醋酸溶液（V/V）。
3.10%亚铁氰化钾溶液。
4.钠标准溶液：
①当量钠溶液：取氮化钠（Ａ．Ｒ．）少许置于烧杯中,放置110～120℃烘箱内4小时,取出后置于干燥器内待冷，精密称取5.845g置于100ml容量瓶内，加蒸镏水至刻度。
②150mEq/L钠标准液:准确吸取当量钠溶液15.0ml,置于100ml容量瓶内,加蒸镏水至刻度。
③250mEq/L钠标准液:准确吸取当量钠溶液25.0ml,置于100ml容量瓶内,
加蒸镏水至刻度。
④200mEq/L钠标准液:准确吸取当量钠溶液20.0ml,置于100m1容量瓶中
，加蒸镏水至刻度。
【实验器材】光电比色计、冰箱、离心机、烧杯、试管、吸管。
【实验方法】
1.收集各实验组相应时间内的尿液，分别合并混匀，测量总量。分
别吸取各组尿液5ml,加入氢氧化钙0.2g,摇匀,放置15分钟,过滤,以除去磷酸盐类。
2.滤过之尿液与等量200mEq/L钠标准液混合吸取0.1ml,按表5.1操作。
表1尿钠测定快速比色法操作步骤
步骤管别空白管（ml）标准管(ml)测定管(ml)与200mEq/钠标准液混合的尿液
150mEq/L标准液
250mEq/L标准液
醋酸铀镁试剂—
—
0.15.0—
0.1
—
5.00.1
—
—
5.0以玻棒充分搅拌，使生沉淀，试管加塞，置冰箱中10分钟，离心沉淀。
分别吸取上清液于另外三只试管中
1%醋酸溶液
10%亚铁氰化钾溶液0.2
8.0
0.40.2
8.0
0.40.2
8.0
0.4
混匀后,10min内用520nm或绿色滤光片光电比色,以250mEq/L钠标准管作空白管，校正光密度到0点，读取标准管（150mq/L钠溶液）及测定管的读数。
计算

Na+mEq/L×2.3=Na+mg/100ml

【注意事项】
1.醋酸铀镁的加入量必须准确，否则将影响实验结果。
2.操作时试管放入冰箱及离心沉淀时，均需加塞，以免试剂中乙醇浓度变化而影响结果。
3.醋酸铀镁试剂中所含醇的浓度必须为80%(V/V)，否则影响钠的沉淀。
4.尿中钾的浓度较高，与醋酸铀镁试剂作用后能与钠共同