肌酸激酶同工酶——MB评估.doc

肌酸激酶同工酶——MB评估

上海仁济医院检验科

肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）是由M和B亚基构成的杂化型二聚体，主要存在于心肌细胞的外浆层，是心肌酶谱中最有特异性的酶，从80年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”，应用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊断[1，2]1979年Gerhardt[3]等人首次报道用免疫抑制原理测定CK同工酶，免疫抑制法以其快速、灵敏、定量且可进行自动分析等优点适合常规检测，随着方法与试剂不断改进与完善，1986年国外已有试剂盒供应，但价格昂贵；最近国内研制成功免疫抑制法测CK-MB的试剂盒，本文旨在对该试剂盒的特性作一评估。

材料和方法

一、标本来源
分正常组，AMI组和非AMI组，非常人血清来自体检健康人员，计30例，AMI组53例，系仁济医院心内科病房已确诊为AMI者，非AMI组系心内科及其它科门诊病人，因胸痛、心率失常等初诊疑拟AMI，后经系列观察和酶学检查证实不是AMI患者，共20例。
血标本留取后及时分离血清检测或将检测血清置于-20度冰箱保存至测定。

二、试剂
1.免疫抑制法检测CK-MB试剂盒：上海北加生化试剂有限公司产品
（1）R1：含CK-MB抗体的咪唑缓冲液
（羊抗人CK-M多克隆抗体抑制剂>2000U/L，100mmol/L的咪唑缓冲液成pH6.7内含葡萄糖20mmol/L，醋酸镁10mmol/L，EDTA2mmol/L）
（2）R2(A)：酶干粉。
（AMP5mmol/L，磷酸肌酸30mmol/L，五磷酸二腺苷10mmol/L，NADP2mmol/L，V-乙腺半胱氨酸20mmol/L，已糖激酶≥2500U/L，G6PDH≥500U/L，ADP2mmol/L）。
2.宝灵曼CK-MB试剂盒：对照用。

三、仪器
HITACHI7150型自动生化分析仪波长=340nm

四、方法
本试验在日立7150生化自动分析仪器上测定，参数表如下：
TEST
ASSAYCODE
SAMPLEVOLUME
R1VOLUME
R2VOLUME
WAVELENGTH
CALIBMETHOD
STD.(1)CONC.–POSZ.
STD.(2)CONC.–POSZ.
STD.(3)CONC.–POSZ.
STD.(4)CONC.–POSZ.
STD.(5)CONC.–POSZ.
STD.(6)CONC.–POSZ.
SDLIMIT
DUPLICATELIMIT
SENSITIVITYLIMIT
SENSITIVITYLIMIT
ABS.LIMIT(INC/DEC)
PROZONELIMIT
EXPECTEDVALUE
TECHLIMIT
INSTRUMENTFACTOR
[CK-MB]
[RATE-A]:[45]-[50]
[5][3]
[240][100][NO]
[60][20][NO]
[][340]
[LINEAR][0][0]
[0.0]-[1]
[65]-[28]
[0]-‘[0]
[0]-‘[0]
[0]-‘[0]
[0]-‘[0]
[0.1]
[100]
[100]
[0]
[9000][INCREASE]
[0][LOWER]
[0]-[25]
[100]-[1000]
[1.0]结果
一、线性范围
取一高活性CK-MB标本：152.0U/L用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得其相应活性分别为38.0、81.0、111.0、131.0、152.0，作图（见图1）。呈典型的抛物线曲线，符合免疫比浊法反应原理。

图1试剂盒测定CK-MB线性
同样操作方法，将CK-MB为79.0U/L的病人血清标本用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得相应活性为18.7、32.5、48.9、65.5、79.0以稀释倍数为X轴，酶活性Y为轴，其线性见图2，可见CK-MB活性在80U/L以下线性良好。

图2试剂盒测定CK-MB线性

二、精密度试验
分别取低、中、高活性的血清标本（简称低值、中值、高值）。按本法操作，批内重复200次，批间是每天测定一次共10天，表1为本试剂盒对五份血清标本所做的重复性试验，批内：n=60，CV=1.66~13.66%，平均6.78%。批间：n=20，CV=6.59~11.73%，平均9.16%，基本符合质控要求，显示该试剂盒有效较高的精密度。
表1精密度试验
标本nmanminXSDCV(%)
批低值2013.08.010.151.3913.66
中值2061.451.755.992.815.02
内高值20168.0158.0163.12.71.66
批低值1015.010.412.451.4611.73
批高值10108.890.198.736.516.59

三、干扰试验
1.甘油三酯（TG）干扰试