口服芹菜素固体脂质纳米粒制剂学及药物动力学研究.doc

口服芹菜素固体脂质纳米粒制剂学及药物动力学研究
胡海洋，刘任，刘丹，赵秀丽，陈大为*
沈阳药科大学药学院，沈阳市沈河区文化路103号，沈阳，110016
摘要：目的：本研究对所制得的芹菜素固体脂质纳米粒的制剂学性质和药物动力学进行研究。方法：使用激光粒度仪，zeta电位值测定仪，透射电镜，X-射线衍射，体外溶出实验考察芹菜素固体脂质纳米粒的制剂学性质；以自制芹菜素混悬液为对照组，考察了大鼠口服芹菜素固体脂质纳米粒的药动学过程。结果：透射电镜观察纳米粒的形态发现该纳米粒为类球形粒子；平均粒径为135nm；Zeta电位为-18.90mV；测定药物在释放介质中的释放符合一级释放方程。X-射线衍射证明芹菜素在固体脂质纳米粒中以无定形形式存在。口服药动学结果表明，芹菜素固体脂质纳米粒组的平均AUC0-t为17.337μgh/mL，而对照组为5.3μgh/mL。纳米粒组的Cmax为3.07μg/mL，明显高于对照组的1.544μg/mL。纳米粒组的消除速率常数Ke较低，为0.232h-1，低于对照组。结论：芹菜素固体脂质纳米粒的相对生物利用度为327%。芹菜素固体脂质纳米粒可有效提高芹菜素的生物利用度。
关键词：芹菜素，固体脂质纳米粒，体外释放，X-射线衍射，药物动力学

1.前言
芹菜素（Apigenin）[1-3]（5,7,4’-三羟基黄酮）属于黄酮类，广泛存在于伞形科植物旱芹叶；卷柏科卷柏全草；柏科圆柏叶中。芹菜素具有多种药理活性：具体表现在抗肿瘤、抗炎症、降血压、抗动脉硬化和血栓症、抗焦虑、抗菌抗病毒以及抗氧化作用等方面。近年来，芹菜素的抗肿瘤作用得到人们的日益关注，其中抗乳腺癌、黑色素瘤、前列腺癌的作用最为显著。但是由于芹菜素的理化性质，水溶性较差，口服吸收差，生物利用度较低，在一定程度上限制了它的应用。
本文采用固体脂质纳米粒这一给药系统作为载体，将芹菜素制备成纳米粒混悬液再口服以达到改善其口服吸收的目的，提高生物利用度。
2．仪器与试药
LC-10AD型高效液相色谱仪，HW色谱工作站，FA1104电子天平,Nicomp-380粒度测定仪（美国ParticleSizingSystems公司），H-100透射电镜（日立公司）TGL-16G型离心机(上海安亭科学仪器厂),恒温水浴锅HH-S型(江苏省红旗医疗仪器厂)。
芹菜素（纯度98%，南京青泽医药科技开发有限公司），PluronicF-68（德国BASF）大豆卵磷脂（上海太伟药业），单硬脂酸甘油酯（天津市博迪化工有限公司）。
3.方法
3.1芹菜素固体脂质纳米粒（AP-SLN）的制备
称取处方量PluronicF68溶解于蒸馏水水中，构成水相；称取处方量的单硬脂酸甘油酯，加热到75±2℃使熔融，处方量磷脂溶于芹菜素醇中，在搅拌状态下分散到熔融的单硬脂酸甘油酯中，构成油相，通氮气挥去乙醇。将水相加热到相同的温度，注入油相中，恒温搅拌，制成初乳。趁热将初乳超声，室温水冷却，过0.22μm微孔滤膜即得。
3.2芹菜素囊泡粒径分布
取“3.1”项下制备的纳米粒稀释至一定浓度，采用LS230激光粒度仪测定粒径及粒度分布。
3.3芹菜素固体脂质纳米粒Zeta电位的测定
取“3.1”项下制备的纳米粒，稀释至一定浓度，放入比色池中，测定zeta电位值。
3.4芹菜素固体脂质纳米粒显微形态
取“3.1.1”项下制备的纳米粒适量，用3％磷钨酸染色，透射电镜下观察其粒子形态。
3.5芹菜素纳米粒体外释放的测定
分别取3mL的AP-SLN及等含量的AP对照溶液置透析袋中，释放介质为磷酸盐缓冲液（pH7.4）+20%乙醇，释放介质体积为50mL，在37℃下50r/min低速搅拌，平行操作三份。每隔一定时间将透析介质全部取出，更换相应的新鲜介质，继续操作，取出的介质用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液HPLC法测定AP浓度，计算累积释放率。
3.6X-射线衍射对冻干后纳米粒考察（XRD）
为了考察纳米粒中药物的分散状态，对药物粉末，物理混合物及冻干后的纳米粒粉末样品进行了X-射线衍射分析。
3.7色谱条件建立
Shimadzu色谱柱(250mm×4.6mm)，流动相为0.1%磷酸水溶液:乙腈(体积比为45:55)，流速1.0mL/min，检测波长312nm，进样量为20L，内标为水飞蓟宾（SB）。
3.8血浆样品处理
精密吸取血浆样品0.2mL，置于1.5mL具塞尖底塑料试管中，依次加入400μg/mL内标溶液10μL，甲醇0.6mL，旋涡混合3min，离心（4000r/min）10min。取上清液用N2吹干，甲醇0.1mL溶解，过滤离心后进样，进行HPLC分析，记录色谱图。将待测物与内标物的峰面积比代入标准曲线，计算各时间点样品中药物的浓度。
3.9芹菜素纳米粒在大鼠体内的药物动力学研究
取大鼠12只