生物分离工程之色层分离法完整学习PPT教案.pptx

色层分离法色层技术（层析技术）色层分离方法－Chromatography层析法的发展过程1941年Martin和Synge发展了分配色谱。
1944年Martin等发展了纸色谱。
1952年Martin和James发展了气-液分配色谱。
1956年VanDeemter等发表关于色谱效率的速率理论，并应用到气相色谱中。
1957年制作离子交换色谱氨基酸分析仪。
1959年在CordonConference上提出了第一篇凝胶过滤色谱的报告。
1963年Giddings的理论工作为现代液相色谱奠定了理论基础。60年代中期凝胶渗透色谱出现。
60年代后期亲和色谱出现。
1969年现代液相色谱开始受到重视。
有两次诺贝尔化学奖是授予色谱学领域的研究工作：1948年瑞典科学家Tiselins由于他的关于电泳和吸附分析的研究获奖，1952年英国的Martin和Synge因为发展了分配色谱而获奖。层析的原理层析分离法层析分离分类（1）⑴分析色谱（10mg）
⑵半制备色谱(10-50mg)
⑶制备色谱(0.1-1g)
⑷工业生产规模色谱(>20g/d)
年产10g合格的重组人粒细胞集落刺激因子（rhGcs-F），其产值高达1亿元。层析分离分类（3）基本概念色层分离法基本原理色层分离法基本原理分子筛层析示意图分配系数解离常数和分离因数洗脱容积Ve理论塔板fr—第r块塔板上溶质的质量分数为：层析介质常用层析介质硅胶琼脂糖琼脂糖（2）葡聚糖纤维素聚丙烯酰胺亲和层析基质活化方法与配基偶联活化方法（1）活化方法（2）环氧基的氨化及偶联配基反应活化方法（3）手臂（spacer)D残余电荷的掩蔽E活化基团与配基密度测定F亲和介质吸附容量测定层析装置与操作PharmaciaÄKTA层析系统PharmaciaÄKTA层析系统装置装柱上样淋洗（去除残留在介质中的杂质）洗脱方法恒定洗脱分步洗脱(c)梯度洗脱
清洗与再生思考题第二十二章色层分离法（第二讲）装置装柱上样淋洗（去除残留在介质中的杂质）洗脱方法恒定洗脱分步洗脱(c)梯度洗脱
清洗与再生无机吸附剂羟基磷灰石(HydroxyIapatite，简称HAP)工艺条件紫球藻B—藻红蛋白的分离纯化藻红蛋白吸附：1mmol／L,PH6.8磷酸缓冲液预平衡(1.8cm×4cm)层析柱
上样量:2mL
洗脱：磷酸盐缓冲液1、5、50、l00、200mmol／L，PH6.8，+0.1MOL/LNaCl溶液
洗脱速度:18mL/h
分步收集洗脱液(每管约4mL)B－藻红蛋白的洗脱曲线体积排阻层析
SizeExclusionChromatography
凝胶渗透层析
GelPermeationChromatography
凝胶排阻层析
GelExclusionChromatography
凝胶过滤
GelFiltration
分子筛层析
GelChromatography凝胶层析的用途特性参数排阻极限分级范围吸水量(溶胀率)凝胶粒径（颗粒大小）床体积表示填充柱中凝胶粒子周围的总空间。
可利用平均分子量为二百万的可溶性蓝色葡聚糖来测出。材料及性能要求化学惰性稳定性刚性可压缩担体柱的流速与压差的关系孔径分布思考题色层技术（层析技术）D残余电荷的掩蔽F亲和介质吸附容量测定思考题上样特性参数