增液润燥汤对干燥综合征模型鼠IL-23表达的影响.docx

基金项目：河南省基础与前沿技术研究计划项目（132300410077）

HYPERLINK"http://epub.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=146&recid=&FileName=1010011934.nh&DbName=CMFD2012&DbCode=CMFD&pr="\t"_blank"增液润燥汤对干燥综合征模型鼠IL-23表达的影响
摘要：目的研究增液润燥汤对SS模型鼠颌下腺IL-23的影响，探究本方治疗SS的机制。方法60只BALb/c小鼠，随机法均分为：正常组，模型组，本方低、中、高组，西药组；免疫诱导法制备SS模型；ELISA法检测IL-23水平。结果模型组IL-23比正常组显著升高；各治疗组IL-23比模型组降低，差别均有统计学意义（P＜0.05）。结论本方能降低SS模型鼠颌下腺IL-23水平，通过降低IL-23水平，抑制病灶炎症反应，减轻唾液分泌腺损伤。
关键词：SS；增液润燥汤；颌下腺；IL-23
干燥综合征（Sjögren'ssyndrome,SS）是一种主要侵犯唾液腺等外分泌腺的自身免疫性疾病，严重影响着人民的生活质量和身心健康。文献研究表明，IL-23在SS发生发展过程中起重要作用，故选用IL-23作为检测指标初步探究增液润燥汤治疗SS的作用机制。
一、材料及设备
1.实验动物：SPF级BALb/c雌性小鼠60只，体重18-20g，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2010-0002。
2.药品：增液润燥汤：北沙参15g、天冬15g、炙紫菀10g、知母10g、乌梅10g、桔梗15g、桃仁10g、制附子6g、炙甘草6g，购于河南中医学院第一附属医院门诊颗粒药房（四川新绿色药业有限公司）；白芍总苷胶囊，宁波立华制药有限公司，国药准字H200550058；百白破疫苗，武汉生物制品研究所有限责任公司，国药准字S19980016。
3.主要仪器：5722分光光度计：北京普析新通用仪器有限责任公司，型号：TU-1901；冷冻离心机：美国Kendro实验室产品公司。
二、方法及步骤
1.制备抗原溶液：取同种鼠颌下腺,剔除淋巴结，切碎,加入RIPA裂解液、PMSF，充分匀浆,10000-14000g转速、4℃条件下匀速离心5min，取上清液，以考马斯亮蓝比色法测定抗原含量。用灭菌PBS将上清液稀释成800ug/mL，加等量CFA，得到400ug/mL的抗原溶液。
2.造模及检测指标：第0、14天，除正常组外的小鼠每侧腹股沟消毒后皮下注射0.05mL抗原。在第2、7天，以上各组小鼠各腹腔注射0.05mL白百破联合疫苗，加强免疫。以颌下腺病理炎性浸润为检测指标。
3.步骤：60只BALb/c小鼠，随机法平均分组如下：
正常组：去离子水；
模型组：去离子水；
增液润燥汤低剂量组（ZYRZI）：0.04g/10g；
增液润燥汤中剂量组（ZYRZII）：0.08g/10g；
增液润燥汤高剂量组（ZYRZIII）：0.12g/10g；
白芍组（BSZG）：0.00234g/10g。
注：灌胃体积：0.2ml/（10g·日·只）；免疫当天开始给药，直至第60天，第61天摘眼球放血法处死小鼠，进行相关处理。
4.IL-23测定：无菌操作台上取两侧颌下腺，称重并记录，冰浴中电动匀浆约1min，4℃、3000rpm下离心20min,取上清液,按照ELISA试剂盒说明书进行检测,以标准物浓度为横坐标，OD值为纵坐标得标准曲线，计算实际样品浓度。
5.以SPSS19.0进行统计学分析，计量资料均采用（±S）表示，所得数据均符合正态分布及方差齐性检验,组间多重比较采用单因素方差分析和LSD检验,以P≤0.05有统计学意义。
三、结果：与正常组比较，模型组IL-23显著升高，差别有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组IL-23比模型组降低，差别有统计学意义（P＜0.05）；与白芍组比较，本方中、高剂量组IL-23水平较低，差别有统计学意义（P＜0.05）（表1）。
表1各组小鼠颌下腺上清液IL-23水平（±S）
组别正常组模型组ZYRZⅠZYRZⅡZYRZⅢBSZGIL-23
(pg/ml)177.67±
39.22294.26±
48.42a223.50±
31.41b201.27±
44.26bc191.04±
23.74bc243.21±
30.01b注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05；与白芍组比较，cP＜0.05
四、结论及讨论
文献研究表明，IL-23能够诱导Th1细胞分化和IFN-γ的产生，是促进Th17细胞增殖分化的重要细胞因子[1]。而Th1、Th17细胞及相关细胞因子IL-17、IFN-γ在SS发生发展及唾