萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定-实验报告.pdf

萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定-实验报告--

萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定

一、研究背景及目的

酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂。大多数由蛋白质组成（少数为RNA）。

能在机体中十分温和的条件下，高效率地催化各种生物化学反应，促进生物体的新陈代谢。

生命活动中的消化、吸收、呼吸、运动和生殖都是酶促反应过程。酶是细胞赖以生存的基础。

细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。因此，对酶的研究是十分

重要的。通过对酶活性的测定，可以更好地了解生物体的代谢过程。

其中，淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，可以分成α-淀粉酶，β-淀粉酶等。α-

淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α-1，4-链。

β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1，4-葡聚

糖链。根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所

催化产生的麦芽糖毫克数。

3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖和碱性二硝基水杨酸试

剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅

程度与还原糖的量成正比。因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。麦芽糖是还原

性糖，可用该方法对其含量进行测定。

本次实验的目的在于通过实验过程，理解淀粉酶测定的原理，熟悉实验操作，掌握实验

方法。

蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，它是与生命及与各种形式的生命活动紧

密联系在一起的物质，对生物来说十分重要。目前有四种蛋白质含量测定方法：凯氏定氮、

Folin-酚法、染料结合法、紫外法，最常用的是后三种。

本次实验选择通过Folin-酚法测定蛋白质含量。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。

过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮

兰法所取代。

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二、实验原理

该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件，保持其处于最适条件，测定酶促反应

的初速度来表示酶的活力。以及通过化学反应使得蛋白质具有特异光吸收，再通过比色法测

定蛋白质含量。

该实验的理论基础为：

（1）酶的性质：淀粉酶是蛋白质，在一定的条件下会发生钝化，可利用此性质将体系中的

非目标酶类钝化，从而测出目标酶类的活力；

（2）3,5－二硝基水杨酸法：3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖

和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，

棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此，我们可以测定样品中还原糖以及总

糖的量。麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。具体反映为：

在加热、碱性条件下：3,5－二硝基水杨酸（黄色）+还原糖—→3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红

色）+糖酸；

（3）比色法原理：朗伯—比尔定律（当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物

质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比）。

三、仪器试剂

1、仪器设备：上海精宏实验设备有限公司DK-S24型40℃水浴锅；天津市中环实验电炉有

限公司22列八孔型70℃电热恒温水浴锅；上海安亭科学仪器厂TDL-408型低速离心机；上

海精密科学仪器有限公司722型光栅分光光度计；DCL-2000DY型电磁炉（佛山市爱庭电器

有限公司）。

2、主要实验器皿：50ml容量瓶，100ml容量瓶，研钵一套，具塞刻度试管若干，试管若干，

烧杯。

3、试剂：

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（1）麦芽糖标准液（1mg/ml）；

（2）的柠檬缓冲液：

A液（称取柠檬酸克，溶解后定容至1L）

B液（称取柠檬酸钠克，溶解后定容至1L）

取A液、B液混匀即为柠檬酸缓冲液；

（3）3，5-二硝基水杨酸溶液（称取3，5-二硝基水杨酸克，溶于20ml1M氢氧化钠中，加

入50ml蒸馏水，再加入30克酒石酸钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100ml，盖紧瓶塞，勿

使二氧化碳进入）；

（4）麦芽糖标准液（称取克麦芽糖，溶于少量蒸馏水中，小心移入100ml容量瓶中，用蒸

馏水定容到100ml）；

（5）NaOH；

（6）试剂甲：

（A）10克Na2CO3，2克NaOH和克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。溶解于500

毫升蒸馏水中。

（B）克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于