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Western技术大全生物通技术专题：既可以定性，又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。Western印迹要想做的好，当然每个步骤都不能马虎，看看这张图，从电泳，转膜，封闭，一抗，二抗到最后的检测，就像“发现号”升空的120万个步骤那样一个也不能少。如果忽视了其中的一步，结果做不出来，也是令人非常头痛的。“工欲善其事，必先利其器”，要想有好的实验结果，好仪器是相当重要的，因此让我们先来看看什么样的仪器能让我们无后顾之忧，顺利痛快的一步到位。Western印迹的仪器主要就是电泳
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WesternBlotting1样品的制备（另）1·1细胞1·2蛋白1·3SampleBuffer：样品=1:1事先调整100℃水浴箱，配好后，水温到位，进行水浴。100℃，30min·2制胶分离胶（10ml）StackingGel浓缩胶2·1准备（10min）抄写配方，8%10%12%15%3ml6ml准备试剂，dH2Oml4.643.32.2dH2Oml2.14.1准备制胶板（注意规格匹配），并洗干净，一定不能留有痕迹丙烯酰胺30%ml2.73.345丙烯酰胺30%ml0.512·2配胶（90min）
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Weasten-blot流程蛋白样本制备(略)―――变性：PCR98℃6min做胶A.做胶根据目标蛋白的分子量来决定分离胶浓度(表1)，压缩胶的浓度无变化；B.确定好分离胶的浓度后再行配置，具体配方见takara；注意配胶时TEMED应灌胶前加，即加即用，充分混匀。C.清洗玻板，洗净后再用超纯水冲洗两遍，晾干；D.玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上注入超纯水1ml测漏，观察5min后无液体渗出，准备灌胶。E.灌胶时，可用10ml枪吸取5ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加
2024-09-06
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