柱前衍生反相高效液相色谱法测定贝类中氨基酸含量_李娜.pdf

李娜，锁然，许成保，黄毅
(河北农业大学食品科技学院，河北保定071001)

摘要:建立了贝类中18种氨基酸的柱前衍生反相高效液相色谱分析法。以2，4－二硝基氯苯作为柱前衍生剂，流动
相为醋酸盐缓冲溶液和乙腈，梯度洗脱采用柱分离，紫外检测器检测对氨基酸衍生条件和水解条件进行了优
。C18。
化。18种氨基酸的工作曲线的相关系数范围为0.9915～0.9991;相对标准偏差在0.9%～4.6%之间;检出限为
0.24～2.37μg/mL;加标回收率88.6%～115.7%。结果表明本方法无干扰，操作方便，灵敏度较高，可用于贝类中氨基酸
的含量检测。
关键词:氨基酸，高效液相色谱，2，4－二硝基氯苯，柱前衍生，贝类

Determinationofaminoacidsinshellfishby
reversedphasehighperformanceliquidchromatography

LINa，SUORan，XUCheng－bao，HUANGYi

(CollegeofFoodScienceandTechnology，AgricultureUniversityofHebei，Baoding071001，China)

Abstract:Amethodforthedeterminationof18kindsofaminoacidsinshellfishwasdevelopedbypre－column
derivatizationhighperformanceliquidchromatography.Aderivationreagentof2，4－dinitrochlorobenzenwasused
forsamplederivatization.Theconditionsforthederivationandhydrolyzationofaminoacidswere
optimized.Detectionconditionswereasfollows:mobilephase－acetatebufferandacetonitrileingradientelution，

separationcolumnC18andUVdetection.Thecorrelationcoefficientsofregressionequationsforthe18kindsof
aminoacidswerebetween0.9915to0.9991，RSDwere0.9%～4.6%.Thelimitofdetectionwere0.24～2.37μg/mL.The
recoverieswere88.6%～115.7%.Themethodissimpleandaccurate，withoutinterference，andcanbeusedfor
detectingaminoacidsinshellfish.
Keywords:aminoacids;highperformanceliquidchromatography;2，4－dinitrochlorobenzen;pre－column
derivatization;shellfish
中图分类号:TS254.7文献标识码:A文章编号:1002－0306(2011)05－0400－04

贝类中含有丰富的蛋白质，其中氨基酸的种类无干扰等特点，而且重现性好，衍生条件简便，衍生
和含量是衡量其营养质量的一项重要指标。氨基酸试剂毒性小，价廉易得，可广泛应用［5－6］。本研究采
的分析方法多采用柱前衍生化反相高效液相色谱用反相高效液相色谱法，以2，4－二硝基氯苯
法，而常用的衍生化试剂有:邻苯二甲醛(OPA)、丹酰(CDNB)作为柱前衍生试剂，对海湾扇贝、牡蛎、杂色
氯(Dansyl－Cl)、9－芴甲基氯甲酸酯(FMOC)、2，4－二蛤和紫贻贝4种贝类中的18种氨基酸进行了分析
硝基氟苯(FDNB)等［1－4］。不同的衍生剂都有各自的测定。
不足，如OPA不能与仲氨酸反应;Dansyl－Cl易与一1材料与方法
些氨基酸生成多级衍生物干扰分离测定;需用
FMOC1.1材料与设备
戊烷萃取衍生完成后过剩的FMOC，使操作繁琐。而
海湾扇贝、紫贻贝、杂色蛤、牡蛎购买于秦皇
2，4－二硝基氯苯(CDNB)作为一种新型的柱前衍生
岛市场;18种氨基酸标准对照品［天冬氨酸(Asp)、
化试剂来分析氨基酸，其柱前衍生和色谱分析条件
谷氨酸(Glu)、组氨酸(His)、丝氨酸(Ser)、精氨酸
与FDNB法类似，但与FDNB法相比，具有理化性质
(Arg)、甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、脯氨酸(Pro)、丙
稳定，制备试样方便简单，过量的CDNB对测定结果
氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、