PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究.doc

PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究
作者：陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉
单位：重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆,400016
提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)分别检测未孕及孕1、3、4、5、7d(分别记为d0、d1、d3、d4、d5、d7)小鼠子宫内膜PTEN基因mRNA的表达和子宫角注射反义寡核苷酸观察胚泡着床数。结果FQ-PCR测得妊娠的子宫内膜组织PTEN的表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增加的趋势,到妊娠第5天达到最高。子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少。结论PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床。
关键词:PTEN;子宫内膜;植入;FQ-PCR;子宫角注射
中图法分类号:R-33;R321.3;R394.2文献标识码:A
PTENgeneexpressioninmouseendometriaincreasesduringembryoimplantationCHENXiao-ling,YANGRong,JIAYong-cun,LIUXiao-yun,WEISha-li(LaboratoryofReproductiveBiology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofPTENgeneinthemouseuterusduringembryoimplanta-tion.MethodsReal-timefluorescencequantitativePCR(FQ-PCR)wasusedtodetectPTENmRNAex-pressedintheendometriaofthenonpregnantmiceandthelatepregnantmice(day1,day3,day4,day5andday7),with20micesacrificedateachfixedday.Outofanother203-dayregnantmice,tenreceivedPTENantisenseoligonucleotideatthehornofuterusandtenreceivednormalsalinetocounttheblastocystsatpregnantday8.ResultsThePTENmRNA/β-actinmRNAinpregnantmicewashigherthanthatofnonpregnantmice,
graduallyhoistedasdayspassedby,andreachedthehighestatpregnantday5.ThenumberofblastocystsinthemicethatreceivedPTENantisenseoligonucleotidewasfewerthanthatreceivednormalsaline.ConclusionPTENpersistentlyexpressesinmouseendometriaduringtheearlypregnancyandmaybeparticipateintheregulationprocessofmouseblastodystimplantation.
Keywords:PTEN;endometrium;implantation;real-timefluorescencequantitativePCR;intrauterineinjection
PTEN是位于人类染色体的10q23的肿瘤抑制基因,编码一种双特异性的蛋白磷酸化酶,能够脱去丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸残基的磷酸[1]。序列分析表明,该蛋白质与张力蛋白和辅助蛋白有很大的同源性[2],促进细胞凋亡的发生。它在体外同时具有脂质磷酸酶和蛋白水解酶的活性。近年的研究表明,它在胚胎发育、着床,细胞迁移,和细胞凋亡等中发挥重要的作用[1,3]。胚胎着床和胎盘形成过程会发生一系列的细胞间相互作用,细胞增值,侵入以及细胞凋亡等,导致着床点处组织重建。细胞凋亡可能在胚胎发育和多余细胞清除方面起关键性的作用。本研究采用实时荧光
定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitativePCR,real-timeFQ-PCR)定量分析PTEN在妊娠早期子宫内膜的表达,用子宫角注射法观察PTEN反义寡核苷酸对胚泡着床的影响,初步探讨它在小鼠胚泡着床过程中的作用,为进一步探讨胚胎着床机制