大鼠胚胎神经干细胞异体移植对脊髓损伤的修复.doc

大鼠胚胎神经干细胞异体移植对脊髓损伤的修复

【关键词】胚胎神经干细胞;脊髓损伤;移植;轴突再生;大鼠
【摘要】目的观察胚胎神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）对成年大鼠脊髓损伤（spianlcordinjury，SCI）的修复及对轴突再生的作用。方法制作20只大鼠SCI（T7）模型，随机分为实验组和对照组。伤后2d实验组移植经全离培养的Wistar大鼠NSCs;对照组只注入DMEM培养液。移植后第1、2、4、6周经电镜及免疫组化观察移植对脊髓轴突再生的影响。结果实验组NSCs与宿主融合较好，损伤区可见幼稚的呈束状排列的再生轴突;对照组轴突变性未见再生轴突。结论NSCs植入异体大鼠打击伤后的脊髓可存活，并产生髓鞘样物质促进宿主脊髓轴突再生。

【关键词】胚胎神经干细胞;脊髓损伤;移植;轴突再生;大鼠

Transplantationofneuralstemcellsintoinjuredspinalcordofadultrat
CHENJun.
DepartmentofLaboratory，TianjinPeopleHospital，Tianjin300121

【Abstract】ObjectiveToobservethetherapeuticeffectofneuralstemcells（NSCs）transplantationonspinalcordaxonalregeneration.MethodsTwentyratsweredividedintotwogroups，10ratsineachgroup.TwodaysafterSCImodelsweremade，NSCssuspension，purifiedfromWistarratsandtransplantedintotheinjuredspinalcordsatT7levels，whilethevehiclesolution（DMEM）wasinjectedinthecontrolgruop.At1，2，4，6weeksaftertransplantation，thesampleswereprocuredandstudiedbyelectronmicroscopeandimmunohistochemicalmethod.ResultsThemorphologyoftranslatedNSCswasalmostnormal，andNSCsarrangementwasgoodinthehost.Axonscouldregrowintoinjuredspinalcords.Theaxonsregenerationwasnotfoundinthecontrols.ConclusionTransplantationofNSCscouldintegratewiththehostandcouldpromotetheaxonsregenerationofhost.

【Keywords】fetusneuralstemcells;spinalcordinjury;transplantation;axonsregeneration;rats
脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）后再生能力受限主要是因为缺乏诱导、促进神经再生的微环境，而非损伤的轴突本身不具有再生能力。人们长期以来采用周围神经、神经胶质细胞和雪旺细胞移植等方法，在不同程度上促进脊髓神经轴突再生。NSCs在促进脊髓轴突再生方面是近年来继雪旺细胞研究之后的又一热点［1］。本研究是建立一个成年大鼠脊髓（T7）损伤模型，于损伤处植入NSCs并观察其对轴突再生的促进作用。
1材料与方法

1.1动物及主要试剂（1）孕14d雌性Wistar大鼠3只;体重230～250g成年Wistar大鼠20只。（2）细胞培养试剂及抗体DMEM.F12和B27添加剂;巢蛋白单克隆抗体（Nestin）;胶质纤维酸性蛋白抗体（GFAP）;神经元特异性抗体（NSE）等。

1.2脊髓损伤模型的建立Wistar大鼠20只乙醚吸入麻醉后俯卧位固定于手术台上，背侧正中切口，暴露T7椎板并切除，显露肌膜，按Allen打击法将打击头（直径2mm，重10g）置于硬膜上4cm处，使重物自然下落，打击量为40g-cm。迅速移开打击头，止血后逐层关闭伤口，复苏后饲养，每8小时挤尿1次，随机分为对照组和实验组各10只。

1.3NSCs的分离和培养取3只孕14d的雌性Wistar大鼠，乙醚吸入麻醉后取出胚胎剪开头皮和软骨，仔细剥离脑表面被膜，分离出大脑半球钳取大脑皮质及皮质下脑室旁的脑组织。置于PBS缓冲液内漂洗3欠，机械分离呈匀浆状，经200μm滤网过滤于内含DMEM.F12（1∶1）、B27添加剂的培养皿中。37℃、5%CO2孵育箱