目的基因的获取.doc

目的基因的获取
——基因工程第一步
方法一：从基因文库中获取（未知序列）
从基因组文库中获取（基因组文库含有该生物的所有基因）
将该生物的所有DNA提取后切成DNA片段插入载体中并导入受体菌群，即形成基因组文库
优缺点：操作简单工作量大，盲目性大，专一性差
从部分基因文库中获取（如cDNA文库）
将目的基因的mRNA反转录并合成双链DNA分子，插入载体中并导入受体菌群，即形成cDNA文库（反转录法，无启动子【使转录开始的DNA片段】、内含子【不转录的DNA片段，与之相对的是具有转录效应的外显子】、终止子【使转录结束的DNA片段】）
优缺点：专一性强操作麻烦，技术要求高
方法二：人工合成
化学合成法
通过蛋白质的氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列进而确定结构基因的核苷酸序列，从而进行化学合成
优缺点：专一性强，可产生新基因适用范围小
反转录法（无启动子、内含子、终止子）
将目的基因的mRNA反转录并合成双链DNA分子，即目的基因
优缺点：专一性强操作麻烦，技术要求高，mRNA生存时间短
方法三：PCR技术扩增
步骤：①向缓冲液（提供相对稳定的pH环境）中加入四种脱氧核苷酸（提供原料）、DNA母链（提供模板）、TaqDNA聚合酶（具有耐高温的特点）、引物（使聚合酶可以开始连接脱氧核苷酸）
②高温解旋形成单链DNA（90~95℃）
③降温使单链DNA与引物结合（55~60℃）
④升温是酶催化合成子链DNA（70~75℃）
优缺点：短时间内大量复制严格控温，技术要求高