流感裂解疫苗纯化及裂解工艺的优化 (1).pdf

#36#中国生物制品学杂志2008年1月第21卷第1期ChinJBiologicalsJanuary2008,Vo1.21No.1

中国图书分类号R37311+3文献标识码A文章编号1004-5503(2008)01-036-04=预防制品>
流感裂解疫苗纯化及裂解工艺的优化

11112111
杨刘红岩马波郭仁彭建新谢飞侯峰代云波

=摘要>目的优化大规模生产的流感病毒裂解疫苗的纯化及裂解工艺。方法比较凝胶层析和蔗糖密度梯度超速
离心的纯化效果,以及TritonX-100和去氧胆酸钠两种裂解剂在不同条件下的裂解效果。结果层析法纯度稍高于蔗糖密度
梯度超速离心法,而蔗糖密度区带超速离心法的收率优于层析法。TritonX-100的裂解效果优于去氧胆酸钠,裂解剂浓度为
0.5%或0.8%,裂解3或4h,裂解率达90%以上。疫苗在4e保存1年后,所有检测项目均合格,4e保存18个月和37e保存
28d后,HA含量仍保持在30Lg/ml以上。结论已建立了切实可行的流感病毒裂解疫苗规模生产的纯化及裂解工艺。
=关键词>流感裂解疫苗;纯化;裂解
OptimizationofProcedureforPurificationandLysisofInfluenzaVirusVaccine

YANGZhev,LIUHong-yan,MABo,etal(vWalvaxBioTechCo.Ltd,Kunming650018,China)

=Abstract>ObjectiveTooptimizetheprocedureforpurificationandlysisofinfluenzavirusvaccine.MethodsComparethepurification
efficaciesbygelfiltrationchromatographyandbysucrosedensitygradientcentrifutgation,aswellasthelysisefficacieswithTritonX-100andwith
sodiumdeoxycholateundervariousconditions.ResultsThepurityofsplitinfluenzavaccineafterpurificationbygelfiltrationchromatographywas
slightlyhigherthanthatbysucrosedensitygradientultracentrifugation,whiletherecoveryofvaccinebythelatterwashigherthanthatbythefor-
mer.TritonX-100showedgoodlysisefficacyascomparedwithsodiumdeoxycholate.AfterlysiswithTritonX-100atafinalconcentrationof
0.5%or0.8%for3or4h,morethan90%ofinfluenzavaccinewaslyzed.Afterstorageat4efor12months,allthequalityindexesofthe
purifiedvaccinemettherelevantrequirements.However,afterstorageat4efor18monthsorat37efor28d,theHAcontentofvaccinewas
stillmorethan30Lg/ml.ConclusionApracticalandfeasibleprocedureforpurificationandlysisofinfluenzavaccinewasdeveloped.
=Keywords>Splitinfluenzavirusvaccine;Purification;Lysis

本文根据WHO规程有关规定和5中国药典6三A3)和B/JiangSu/10/2003株(简称B)。
部(2005版)相关规定,并参阅文献,对流感疫苗裂113试剂及仪器
解病毒抗原超速密度区带离心及凝胶层析纯化病毒SerazymOvalbuminELISA试剂盒购自SeramunD-i
的具体方法进行了优化,建立了有效的规模化生产agnosticaGmbH;牛血清白蛋白标准品购自中国药品生
疫苗的裂解和纯化工艺。物制品检定所;蛋白纯化仪AKTAexplorer100为Phar-
macia产品;介质Sepharose4FF为Pharmacia产品。
11材料与方法114病毒培养及纯化
111鸡胚取工作种子,以稀释度10-3接种于11日龄的普
种子批制备使用9~11日龄SPF鸡胚,来自北通鸡胚,经3