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CST常见问题与回答（最新版本）

1、我该如何储存我的抗体？多高的温度会影响抗体的稳定性？
答：请将抗体的原始管储存到-20°C，不要分装，否则有可能引起抗体的改变和浪费。提供的抗体贮存在包含50%甘油缓冲液中，在推荐的储存温度下不会冷冻。这避免了由于反复冻融导致的抗体降解。偶联抗体可能储存在4°C，请参照产品说明书上的建议储存。

2、如何储存SDS裂解的磷酸化蛋白样本？
答：如果短期内使用(少于3个月)，SDS样本细胞裂解液可以储存在-20℃，如果长期储存，应保存于-80℃。活化的蛋白样本的降解变化很大，其降解率取决于每种蛋白的性质和样本里究竟含有多少活化的蛋白。

3、能用室温孵育抗体1小时代替4℃过夜吗？
答：不建议。CST公司活化特异的抗体用于区分一或两个翻译后修饰的氨基酸残基。这些修饰包括磷酸化，乙酰化和酶切割。与识别总蛋白的抗体相比，大多数针对这些修饰位点的抗体具有较低的亲和性。因此，通过4℃孵育过夜延长抗原和抗体的反应时间以获得最好的信噪比是非常关键的。

4、当我准备细胞裂解液样品时，需使用什么缓冲液？
答：请检查每个产品说明书中包含的Westernblot操作步骤中推荐的缓冲液。CST提供以下缓冲液(见下表)，或者，如果你想自己配制，CST网站上列出了特别的缓冲液组分。CHAPS缓冲液专为获得细胞质的提取物而设计，适应于Caspase的检测，但并非关键。
样本处理推荐使用缓冲液全细胞裂解物，使用标准
的SDS-PAGE上样缓冲液
#7722或#7723蓝色的上样缓冲液包装
#7722或红色的上样缓冲液
包装#7723免疫沉淀和/或激酶分析，
使用#9803细胞裂解缓冲液(10X)
#9803切割的半胱天冬酶和其底
物的免疫印迹，使用#9852CHAPS缓冲液(10X)#9852
5、CST的抗体是否适用于全组织样本裂解物？
答：CST并未测试所有抗体是否适用于全组织样本裂解物，但是CST的很多抗体已经被其他客户用于整个组织而且取得巨大成功。

优宁维微信公众号：优宁维抗体专家/UNIVSUBC

6、如何为磷酸化目标蛋白准备阳性细胞裂解液对照？
答：请参考CST网站上该产品的Westernblot图，使用图述的细胞系和药物处理，能够得到阳性对照蛋白。也可参见：www.cellsignal.com/support/controls.html查阅

7、假如说明书上某个种属未被列出与CST抗体有交叉反应，是否意味着这个种属未被检测过呢？
答：可能未被检测过。CST科学家检测所有CST抗体在多个物种的交叉反应性，如果可能的话（这个依赖于目标蛋白和实验系统的可行性）。假如我们没有获得某个种属的交叉反应的阳性结果，我们就不会列出这个种属。然而，有可能我们检测的这个细胞系包含一个低水平的特定蛋白，或者，我们使用的诱导条件对那个特定的细胞系不起作用。如果您需要针对某个种属交叉反应的更多信息，请随时联系我们的技术支持团队HYPERLINK"mailto:[e-mail]"[e-mail]或者优宁维公司来获取帮助。

8、使用CST抗体时，为什么我不能使用我们自己实验室的免疫印迹操作流程？
答：CST™抗体经过优化以提供最强的信号，最少的背景，使用CST推荐的免疫印迹操作流程，对于终端客户的优点是节约时间和材料。

9、如何确保Westernblot结果的可重复性？
答：至于为什么看起来较难重复Westernblot结果，这里有几种可能性。要发现这种情况的原因，可考虑以下：
9-1）你是如何储存抗体的？请参考问题1，2。
抗体稀释后不能重复使用。许多抗体有一个非常低的工作浓度，很可能这个浓度随着连续的Westernblot会减少。
9-2）你确定你的样本中包含活化的蛋白？细胞裂解液样品制备活化蛋白会由于细胞数量，药物诱导时间，细胞传代数量和储存条件不同而改变。
CST产品在其保质期内都有最佳表现。请访问www.cellsignal.com/support/shelflife.html产品保质期页面获得列表。请注意：不能分装抗体。

10、如何使用固相抗体来做免疫沉淀？
答：要得到最佳的结果，获得均匀的微珠悬浮液是重要的。以下步骤可确保同质：
•将包含微珠悬浮液的管子放入冰桶10分钟。
•倒置管子几次以获得50%微珠-缓冲液悬浮液。
•假如可能，温和漩涡管子。
•为了迅速吸出产品，切掉吸管端头，将吸管端头插入微珠悬浮液使靠近固相抗体微珠混合物。孵育抗体和200μg的细胞裂解物(约1mg/ml)4℃过夜，用推荐的抗体稀释浓度。

11、当有多种抗体可以选择时，哪一种在我的实验中表现最优？
答：通常，CST会针对一个目标蛋白提供多个抗体。