毛细管电泳技术及应用.ppt

毛细管电泳技术及应用电泳经典电泳毛细管电泳（CapillaryElectrophoresis,CE）分离过程毛细管电泳的特点一、CE基本原理
二、电渗现象与电渗流electroosmoticflow
三、影响电渗流的因素
四、淌度mobility
五、CE中的参数与关系式
六、影响分离效率的因素毛细管电泳(CE)基本原理所以，迁移速度：电渗现象与电渗流electroosmosisandelectroosmoticflow2.HPCE中的电渗现象与电渗流3.CE中电渗流的大小与方向CE中电渗流的方向4.CE中电渗流的流形5.CE中电渗流的作用CE中影响电渗流的因素3.电解质溶液性质的影响4.温度的影响5.添加剂的影响淌度MobilityCE中的参数与关系式3.分离度影响分离效率的因素—区带展宽3.焦耳热与温度梯度的影响4.溶质与管壁间的相互作用5.其他影响因素一、高效毛细管电泳仪

二、流程与主要部件

三、进样方式

四、检测器仪器流程与主要部件1.高压电源3.缓冲液池CE具体操作步骤：
毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。
1).清洗毛细管
对于一根新的或久未使用的毛细管，需用1mol/L的NaOH溶液、0.1mol/LNaOH溶液、超纯水依次清洗。在有些情况下还需用0.1mol/LHCl、甲醇或去垢剂清洗,强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子，甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质。在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。2).更替电泳缓冲液
在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。
上一步清洗过程结束后，毛细管和电极从清洗液中移至电泳缓冲液，不可避免地将强碱或强酸等溶液带至其中。缓冲液本身也会因挥发、电泳等而改变其离子强度。因此对于精确分析，每分析五次后需更换一次样品盘中的缓冲液。一般分析，半天更换一次即可。3）毛细管电泳的进样方式毛细管一端插入样品瓶，加电压；Buffer:50mMphosphate–TEA(pH2.5)with4.0%HP-β-CD(w/v)and50%methanol;Appliedpotential:30kV;Sample:1mg/Lpropranololdissolvedin(A)(B)water,(C)methanol;
(A)Pressureinjection0.5psi.,5s,
(B)(C)electrokineticinjection10kV,5s.(A)ConditioningofthecapillarywithalowpHbuffercontainingCTAB,andinjectionofalongwaterplugintothecapillarybypressure;
(B)Field-amplifiedinjectionofcationsandstackingontheboundaryofwaterplugandtheBGS,whileremovingofthewaterplugoutofthecapillary;
(C)Separationvoltageisapplied.TheenantiomerscomplexwithCDandareseparated,andtherestofwaterplugisremoved.分离模式一、毛细管区带电泳capillaryzoneelectrophoresis，CZE二、毛细管凝胶电泳capillarygelelectrophoresis，CGE1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。2.电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流>ν电泳，负电胶束以较慢的速度向负极移动；1.根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术；
2.毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度；
3.氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；4.聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；1.将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。
2.负离子分析时，前导电解质的淌度大