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苦豆子渣中总黄酮含量的测定

【摘要】建立提取生物碱后的苦豆子渣中总黄酮含量的测定方法，为苦豆子再利用提供依据，本实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH分光光度法测定苦豆子渣中黄酮的含量。研究表明：以芦丁对照品，在一定条件下，芦丁的浓度与吸光度呈线性关系，回归方程为Y=11.403X+0.0021，R=0.9998，方法回收率98.67%~100.33%，=1.65%(n=9)。建立的方法简便快速、成本低，可用于苦豆子渣中总黄酮含量的测定。
【关键词】苦豆子渣总黄酮分光光度法
苦豆子是豆科槐属的多年生草本植物，广泛分布于我国西北一带，我国对其药用记载较多。药用根、茎、全草及种子，味苦性寒，有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、治疗乙型肝炎的药理活性等作用[1]，其主要活性成分为生物碱。随着现代药理药效学研究的不断深入，近年研究发现，苦豆子的主要化学成分除生物碱外，还有黄酮类、有机酸、氨基酸、蛋白质和多糖类成分[2]。目前国内外研究的重点是生物碱，有关苦豆子渣中总黄酮提取及含量的测定的研究未见报道。据在宁夏地区调查，紫金花集团药业有限公司“十一五”期间，完成国家发改委批准的“年产100吨苦豆子生物碱高技术产业化示范工程项目”和相关系列产品的开发，宁夏盐池县金豆植物生化有限公司等多家企业苦豆子生物碱提取已形成产业化，而提取过生物碱后的苦豆子废渣一般作为饲料或废弃，造成了极大的浪费。为了更好地综合利用这一药材资源，变废为宝，我们对其苦豆子渣进行了进一步的研究。这不仅对保障人类健康有重要作用，而且还有着重大的社会、经济和环境效益。
1实验部分
1.1仪器与药品
722型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），KA-1000台式离心机（上海安亭科学仪器厂），RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），HH-Ⅰ恒温水浴锅（国华电器有限公司），JY3002电子天平（上海精密科学仪器有限公司），TG322A微量分析天平（湘仪天平仪器厂），KQ2200型超声波清洗器（昆山市超生仪器有限公司）。
提取生物碱后的苦豆子种子渣（宁夏紫金花集团药业有限公司），粉碎机粉碎过40目筛，备用，芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080—200707），无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。
1.2方法与结果
1.2.1对照品溶液的制备
准确称取芦丁对照品10.00mg，置100mL容量瓶中，加入60%乙醇70mL置恒温水浴上微热使之溶解（45℃），冷却，再加60%乙醇至刻度，摇匀，配成0.100mg/mL的对照品溶液[3]。
1.2.2标准曲线制备
精确量取对照品溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL分别置10mL容量瓶中，各加60%乙醇至5mL，10%亚硝酸钠溶液0.30mL，摇匀，放置6min，然后再各加入10%的硝酸铝溶液0.30mL摇匀，放置6min，最后加入1mol/L氢氧化钠溶液4.00mL加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，照分光光度法[4]，在510nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=11.403X+0.0021，相关系数为R=0.9998，0.0100～0.0500mg/mL范围内呈良好的线性关系。
1.2.3样品提取方法的选择
1.2.3.1超声提取法取苦豆子渣粉2.00g，加入20mL75%乙醇，超声提取三次，每次1h，合并滤液，减压浓缩至浸膏，加入60%乙醇溶解，定容至10mL，摇匀，作为供试品溶液。
1.2.3.2索氏提取法取粉碎过筛后的苦豆子渣子2.00g，60mL75%乙醇，85℃下回流至流液几乎无色为止，将提取液减压浓缩至浸膏，加入60%乙醇溶解，定容至10mL，摇匀，作为供试品溶液。
1.2.3.3热回流提取法取粉碎过筛后的苦豆子渣子2.00g，20mL75%乙醇，85℃下热回流提取3次，每次回流2h，合并滤液，减压浓缩至浸膏，加入60%乙醇溶解，定容至10mL，摇匀，作为供试品溶液[5]。
上述三种方法提取的供试品溶液，同1.2.2的测定方法进行操作，结果表明，热回流提取法吸光度值最大，因此选择热回流提取，结果见表1：
表1三种不同提取方法的比较
提取方法吸光度超声波提取0.291
索氏提取0.343
热回流提取0.5941.2.4精密度实验
精确吸取对照品2.00mL，同一供试品溶液0.50mL，各5份，同1.2.2的方法进行操作，测定吸光度。结果表明对照品吸光度的RSD=1.27%<5%(n=5)，供试品吸光度的RSD=1.36%<5%(n=5)，说明精密度良好。见表2。
表2精密度实验结果12345RSD(%)供试品吸光度（A）0.22