微生物的分离和纯培养.ppt

第二章微生物的纯培养和
显微技术微生物的分离和纯培养§1微生物的分离和纯培养无菌技术微生物纯种分离单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落(colony)。一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；
单个微生物只在固体培养基上形成菌落；
在液体培养基中不会形成菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落一、用固体培养基（营养琼脂平板）分离纯种微生物样品（二）、纯种平板分离的不同方法涂布平板法2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)分区划线法（蛇形线法）操作图分区划线法适用范围：
适用于浓度较大的样品连续划线法操作图培养严格厌氧微生物二、用液体培养基分离纯化培养培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释，如果经稀释后的同一稀释度的大多数（95%以上）试管中没有微生物生长，有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。上节课知识回顾三、单细胞（单孢子）分离个体较小的微生物需采用显微操作仪Eachcolonywasexaminedmicroscopically四、选择培养分离1、利用选择培养基进行直接分离含牛奶选择培养基目的菌生长平板例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。微生物纯培养分离方法的比较六、无菌技术1、所用物品的灭菌技术B、培养基或溶液的灭菌C、血清或生长因子溶液灭菌上节课知识回顾2、接种1.接种针2.接种环3.接种钩4.接种锄5.接种铲6.接种匙7.接种刀8.接种刀9.剪刀10.钢钩11.镊子12.弹簧接种枪13.接种、枪（日本式）接种环的灭菌挑选单个菌落1、实验台

2、空气
七、微生物的保藏技术传代培养保藏
冷冻保藏
干燥保藏
纸片保藏
薄膜保藏
寄主保藏传代保藏冷冻保藏干燥保藏标准菌株的保存使用国内外菌种保藏部分情况普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)--中科院微生物所,北京(AS),真菌、细菌;中科院武汉病毒研究所,武汉(AS-IV),病毒。
农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)---中国农业科学院土壤肥料研究所,北京(ISF)。
工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)---轻工业部食品发酵工业科学研究所,南京(ID),真菌;卫生部药品生物制品检定所,北京(NICPBP),细菌；中国医学科学院病毒研究所,北京(IV),病毒。抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)---中国医学科学院抗菌素研究所北京(IA)；四川抗菌素工业研究所,成都(SIA),新抗菌素菌种;华北制药厂抗菌素研究所,石家庄(IANP),生产用抗菌素菌种。
兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)---农业部兽医药品监察所,北京(CIVBP)。
除了上述保藏中心外,我国从事微生物研究并保藏有一定数量各类专业用微生物菌种的科研单位、大专院校还有近百所。世界55个国家的菌种保藏机构共352个,目前主要的菌种保藏机构有:
美国的“美国典型菌种收藏所”(ATCC)，保藏方式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法。
美国“农业研究服务部菌种收藏所”(ARS)设立在“北方地区研究室”(NRRL);
荷兰“真菌中心收藏所”(CBS);
日本“大阪发酵研究所”(IFO);
法国“里昂巴斯德研究所”(IPL);
西德“柯赫研究所”(RKI);
苏联“苏联科学院微生物研究所”(IM)。作业上节课知识回顾