菌种保存方法.doc

沙土管法将沙或土过筛﹑烘干﹑装管﹑灭菌﹑然後将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀﹐放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分﹐干燥後保存或用火焰封管後保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态﹐可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌﹑梭状芽孢杆菌﹑放线菌﹑镰刀菌等。

甘油管好弄，你首先用水把孢子收集起来弄成孢子悬液，然后用孢子滤器过滤一下之后，离心收集孢子，用20%的甘油（甘油的浓度好像不同实验室方法还不太一样，有的用的是30%）重悬，然后就可以放-80度保存了~
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我这边用了一个超级简单的甘油保存法，希望对你有所帮助，先把纯甘油灭菌，待冷却后直接加入生长好的好的斜面里，甘油的量以刚淹没斜面最好，然后将斜面直立放置于4摄氏度冰箱里，用该方法保藏菌种可存活半年左右
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安瓿管要有冷冻干燥，还要真空，不好操作
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甘油保存法：把菌孢子用少量无菌水收集到小试管中，加入灭菌甘油，使管中甘油浓度大于70%，摇匀，存入冰箱，

一般我在保存放线菌时，也是保存放线菌孢子的。先是制备孢子悬液，离心收集孢子，20%甘油悬浮，分装保种管，-80℃冰箱保存。不过没有长时间（>1y)来验证好坏，但我觉得放线菌活力还好，也没有什么污染，关键是很方便操作。

放线菌的菌落放线菌的菌落放线菌的菌落放线菌的菌落放线菌在固体培养基上形成与细菌不同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色，使得菌落的正反面呈现出不同的色泽

细菌保存：液体培养，至OD>0.1，再与50%的甘油等体积混合，甘油要两次灭菌

菌种保存原理：菌种冻存与复苏原则是：慢冻速融。即冻存时要先-20℃，在冻存-80℃。而复苏时直接将冻存的丢37℃快速融化。

斜面保存发：适用于细菌、放线菌、酵母、丝状真菌短期保藏。HYPERLINK"http://wenwen.soso.com/z/Search.e?sp=S霉菌&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlink"霉菌、HYPERLINK"http://wenwen.soso.com/z/Search.e?sp=S放线菌&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlink"放线菌及有HYPERLINK"http://wenwen.soso.com/z/Search.e?sp=S芽孢&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlink"芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。

放线菌：（甘油浓度40%-60%）——廖老师
1、将纯甘油先干热160℃过夜12h
2、再将纯甘油湿热灭菌
3、将灭俩次菌的纯甘油与灭菌的无菌水等体积混合至浓度为50%，并再次灭菌
4、将灭菌的50%甘油分装进小红帽（1-2ml）
5、将长满孢子的放线菌直接刮取放入小红帽
6、先-20℃，在冻存-80℃
细菌：
1、将纯甘油先干热160℃过夜12h
2、再将纯甘油湿热灭菌
3、将灭俩次菌的纯甘油与灭菌的无菌水等体积混合至浓度为50%，并再次灭菌
4、将灭菌的50%甘油分装进小红帽（1-2ml）
5、取细菌液体培养（至OD>0.1）加入小红帽中，与50%的甘油等体积混合
（甘油终浓度25%）——小木虫网站
6、先-20℃，在冻存-80℃

真菌：（不确定）
1、试管洗涤干净，风干，每管装PDA，塞好硅胶塞，再灭菌30min1.2MP
2、无菌室内接种菌种，培养至长好孢子
3、再将试管每6-10个一捆扎住，管口朝上直立与准备好的盒内，往盒内加蒸馏水2/3.在保存4℃——中文文献

1、将纯甘油先干热160℃过夜12h
2、再将纯甘油湿热灭菌
3、将灭过俩次菌的纯甘油与灭