磷酸缓冲液的(PH6.doc

磷酸缓冲液的（PH6.8）配制

A：磷酸二氢钾：4.559g+500ml蒸馏水
B：磷酸氢二钠：11.908g+500ml蒸馏水
C：Giemsa原液

A+B+C=22ml+27ml+7.5ml
磷酸缓冲液的（PH7.2）配制
A：磷酸二氢钾：1.77g+1000ml蒸馏水
B：磷酸氢二钠：19.4g+1000ml蒸馏水

C带制作法
1.用0.0175M的NaOH溶液处理半分钟后再处理1分钟，取出放在75﹪、75﹪、95﹪、95﹪的各级酒精中漂洗1-2分钟（脱水），将玻片干燥后置于已经预热650C的6SSC溶液中，放在水浴箱中12-17小时，再用370C预热的蒸馏水漂洗干净，染色。

试剂的配制方法
NaOH0.7g+蒸馏水1000ml
12SSC溶液

微核率操作步骤
培养72小时标本----收集离心1500/分钟（10分钟）----去上清----加预热的0.1MKCL（37度）----混匀，培养箱5分钟----预固定（1ML）室温5分钟----离心----去上清，固定（5ML）20分钟----离心，去上清，加适量的固定液、混均----制片。

3ml的蒸馏水+3ml的Giemsa.

McI1vaine’s储藏液、染色液、冲洗液的配置
目的：
McI1vaine’s储藏液是为玻片染色准备。
McI1vaine’s冲洗液是为产前染色体检查准备。
二．料和试剂
1磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），分子量是328
2柠檬酸（C6H8O7），分子量是210.14
3去离子超纯水
4甲醇（CH3OH）
三．操作步骤
McI1vaine’s储藏液：
1．A液：0.2M的磷酸氢二钠溶液(71.6g+1000ml水)
B液：0.1M的柠檬酸溶液(21.014g+1000ml水)
2．375ml的A液+125ml的B液
3．用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
4．贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月）

McI1vaine’s染色缓冲液
2730ml水+180mlMcI1vaine’s储藏液+30ml甲醇
用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月）

McI1vaine’s冲洗缓冲液
2820ml水+180mlMcI1vaine’s储藏液
1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月）

染色液配制：24ml麦氏染色缓冲液+16ml水+14ml磊氏染色储存液（1.6mg/mL）

磊氏染色储存液：0.8g(磊氏染色液Sigma)+500ml(甲醇)，磁力搅拌器搅拌2小时，置于37度的恒温箱72小时。