细胞形态结构观察和光学显微镜的使用.ppt

实验一细胞形态结构观察和光学显微镜的使用

一.实验原理
细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。
二.试剂与器械
普通光学显微镜，兔肝细胞玻片标本，草履虫玻片标本。
基础知识2.荧光显微镜3.激光共聚焦扫描显微镜4.暗视野显微镜
暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。
5.相差显微镜
6.偏光显微镜
偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
7.微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。9.透射电子显微镜内质网透射电镜图（伪彩色）10.扫描电子显微镜11.显微操作技术在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)
10×0.255.40
40×0.650.39
100×1.300.11

显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，
公式为:M=K1xK2
焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的
上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全
厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。厚标本和薄标本瞳距调节屈光度调节粗调松紧调节旋钮聚光镜中心调节孔径光栏调节孔径光栏开度与图象孔径光栏的运用操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。
(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。3.观察操作：
(1)低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
(2)兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察
先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。四.注意事项
1.低、高倍镜的使用。
2.合轴调节。

五.实验结果
1.描绘一个兔肝细胞的基本形态结构。
2.熟练显微镜的调节。

六.思考题
比较真核细胞和原核细胞的形态结构及其区别。