荧光免疫标记技术.ppt

任务八荧光免疫标记技术任务过程患儿，男，间断发热五天，伴咳嗽3天。体温最高39度，病程第2天查血常规正常，诊断“呼吸道感染”并静滴“阿奇霉素”3天，无明显改变，即而出现咳嗽，为阵发性刺激性咳嗽，少痰，胸片提示：双肺纹理增粗，右上肺片影。复查血常规仍正常。患儿肺部感染系哪种病原体所致？如何快速诊断？【主要试剂与器材】
1.抗原基质片固定有核抗原，可采用小鼠肝组织切
片或印片经丙酮固定即可。目前有商品化试剂供应。
2.标记抗体FITC标记的羊抗人IgG，有商品化试剂供
应。临用时稀释至工作浓度。
3.0.01mol/LpH7.2PBS。
4.缓冲甘油9份甘油和1份PBS混匀。
5.待检血清，阴性、阳性对照血清。
6.其它荧光显微镜、染色缸、吸管、微量加样器等。【操作方法】【结果判断】【注意事项】【应用与评价】讨论分析荧光寿命---荧光物质被瞬时光脉冲激发后产生的荧光衰减到一定程度所用时间。
荧光淬灭---荧光物质的荧光辐射能力在受到激发光较长时间的照射后发生的减弱现象。
淬灭剂---苯胺、硝基苯、酚等
荧光（标记）物质的保存荧光FITC+RB200标记光源：高压汞灯、氙灯、卤素灯
滤板：隔热滤板、激光滤板（UG、BG）、吸收滤板（OG、GG）
光路：透射光、落射光a透射光b落射光荧光显微镜台式机---FACSCalibur大型机---FACSVantageSE
基本原理---荧光显微镜；荧光Ab；标本（组织或细胞中Ag)
技术类型：
直接法---荧光素标记Ab直接检测
间接法---荧光素标记二抗
补体结合法---荧光素标记抗补体Ab
双结合法---两种荧光素标记Ab讨论分析间接免疫荧光检测自身抗核抗体双色直接染色细胞直方图分析：对细胞的某一个单参数进行统计分析
横坐标为荧光或散射光强度
纵坐标为细胞数讨论分析间接免疫荧光法示意图
荧光免疫显微技术在医学检验中的应用：
细菌检验---细菌培养物、感染组织、病人分泌排泄物等（菌种鉴定）
病毒检验---特殊意义
亦可检测血清中Ab(间接法)---流行病学调查和临床回顾性诊断
寄生虫检验---间接法测Ab,如抗疟Ab、阿米巴Ab等
自身Ab检测配分与评分标准配分与评分标准配分与评分标准
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