黄原胶发酵MicrosoftWord文档.doc

黄原胶发酵工艺
1、培养基
1.1斜面培养基（100ml）
葡萄糖3.0；蛋白胨0.5；酵母粉0.3；
氯化钠0.5；琼脂2.0；pH7.0~7.3
灭菌条件：1℃，20min；
培养温度：30℃；
培养时间：24-48h
1.2种子培养基（100ml）
葡萄糖2.0；蛋白胨0.5；酵母粉0.1；牛肉膏0.3；
pH7.0-7.3；
灭菌条件：115℃，20min；
培养温度：30℃；
培养时间：10-15h
1.3发酵培养基（100ml）
葡萄糖3.0；蛋白胨0.2；酵母粉0.1；
NaHPO40.1；KH2PO40.3；K2SO40.1；MgSO47H2O0.1;
pH7.0-7.3；
灭菌条件：115℃，20min；
培养温度：30℃；
培养时间：48-62h
2培养过程
2.1斜面培养基
配置400ml的斜面培养基，分装试管，于115℃下灭菌20分钟，之后摆斜面，冷却至室温后，将凝固后的斜面放于30℃培养箱过夜。
转接斜面菌种，将转接好的斜面菌放于30℃培养箱培养24-48小时。
2.2一级种子培养
配置种子培养基：按照种子培养基配方配置3000ml分别装到5000ml和500ml的三角瓶中，装液量分别为100ml/500ml三角瓶（用于一级种子培养）；1000ml/50000ml三角瓶（用于二级种子培养），于115℃下灭菌20分钟。
接种：将培养好的斜面菌种接种到一级种子培养基中（100ml/500ml三角瓶），接种量为每瓶2-3接种环（将整个斜面上的菌种全部刮下，接种到一级种子培养基中），放在30℃摇床培养10-15小时，转速为200rpm。
2.3二级种子培养
将培养好的一级种子接种到二级种子培养基中（1000ml/5000ml三角瓶），接种量为10%（v/v），放在30℃摇床培养6-8小时，转速为200rpm。
3发酵罐培养
配置发酵培养基20L，考虑到接入的种子液的体积（10%，2000ml），所以培养基配置定容时为18L。
将培养好的二级种子接种到发酵罐中，接种量为10%（v/v，）温度30℃发酵罐初始搅拌转速为100rpm，通风量为1.5-2。0vvm，初始pH为7.0-7.3，中间过程不控制pH。
4产物提取
取一定体积的发酵液，加入三倍体积的无水乙醇沉淀过夜，过滤得到沉淀物，放置于50℃通风箱内干燥，至恒重，称重。
5发酵过程中需要检测的数据及测定方法
发酵液OD
取一定体积的发酵液进行适当的稀释，然后用分光光度计在620nm波长下测定吸光度。
葡萄糖含量
取一定发酵液进行适当的稀释，8000rpm离心15min，取上清，采用SBA检测。
发酵液黏度
发酵过程中取大约100ml发酵液，用Blankspoon粘度计（DV-E,VISCOMETER）测定其黏度。
黄原胶产量测定
发酵结束后取10ml发酵液，用三倍体积无水乙醇沉淀黄原胶，8000rpm离心15min，去上清，沉淀的黄原胶50℃通风箱内干燥至恒重，用分析天平称重。
pH值测定
用pH计测定发酵液的pH值。
菌体干重的测定
取发酵液10ml加入20ml去离子水稀释，放置在80℃水浴锅中用1mol/LNaOH调节pH10后，水浴15min，然后用1mol/LHCl调节pH7.0，迅速12000rpm离心20min，去上清，流沉淀，于50℃通风箱内干燥至恒重（8-10h）。
6计划取样时间及待测参数
前24小时发酵过程中，每隔4小时取一次样测定pH、发酵液OD、黄原胶产量、菌体干重、葡萄糖含量、发酵液黏度。