DNA提取纯化.ppt

Chapter3基因工程需要三种不同的DNA: 全细胞DNA(总DNA,totalcellDNA) 质粒DNA 噬菌体DNA学习内容：1.制备总DNA1.1培养、搜集细菌细胞1.1培养、收集细菌细胞
Harvestingbacteriabycentrifugation1.2制备细胞提取物Preparationofacellextract.1.3DNA的纯化Removalofproteincontaminantsbyphenolextraction.
DNA的浓缩
最常用的浓缩方法是乙醇沉淀（同时含有Na离子的条件下）。DNA沉淀可用玻璃棒挑出，或者离心沉淀（杂质）。
1.4DNA的浓缩与浓度、纯度的测定核酸具有结合染料的能力DNA浓度的测定琼脂糖凝胶电泳检测琼脂糖凝胶电泳的制备和检查琼脂糖凝胶电泳的制备和检查溴酚兰作用？琼脂糖凝胶电泳的制备和检查P102电泳检测1.4DNA的浓缩与浓度、纯度的测定Theuseofananion-exchangechromatographyresininDNApurification.1.5植物总DNA的提取CTAB法提取植物DNA2质粒DNA提取2质粒DNA提取2.1根据分子大小提取质粒DNA2.2根据分子构造提取
碱裂解法
在非常窄的pH范围内，非超螺旋化的DNA会变性，而超螺旋化的质粒DNA不变性。
在裂解液中加入氢氧化钠，调pH值至12.0~12.5，破坏氢键，使非超螺旋化的DNA变性。加入酸，变性的细菌DNA进一步聚集形成沉淀，通过离心的方法去除。
同时利用SDS裂解，KAc中和可以去掉大部分的蛋白质和RNA。上清液中只剩下超螺旋化的质粒DNA了。
Plasmidpurificationbythealkalinedenaturationmethod.取液体培养液1.5-3ml于Eppendorf管中，10000r/min离心1min，去掉上清液，加入100l溶液Ⅰ，充分混匀;
加入200l新配制的溶液Ⅱ，加盖颠倒6-7次使之混匀，冰上放置5min;
加入150l溶液Ⅲ，加盖后颠倒6-7次混匀，冰上放置5min。
I型：超螺旋环状
II型：带切口环CircularformsofDNAmigrateinagarosedistinctlydifferentlyfromlinearDNAsofthesamemass.Typicallyuncutplasmidswillappeartomigratemorerapidlythanthesameplasmidwhenlinearized.Additionally,mostpreparationsofuncutplasmidcontainatleasttwotopologically-differentformsofDNA,correspondingtosupercoiledformsandnickedcircles.Theimagetotherightshowsanethidium-stainedgelwithuncutplasmidintheleftlaneandthesameplasmidlinearizedatasinglesiteintherightlane.2.2根据分子构造提取CsCldensitygradientcentrifugation.PartialunwindingoftheDNAdoublehelixbyEtBrintercalationbetweenadjacentbaseparirs.2.2EB—CsCl密度梯度离心法PurificationofplasmiodDNAbyEtBr-CsCldensitygradientcentrifugation2质粒DNA提取Plasmidamplification3噬菌体DNA的制备3噬菌体DNA的制备3.1噬菌体的培养
Inductionofaλcllysogenbytransferringfrom30℃to42℃Achievingtherightbalancebetweencultureageandinoculumsizewhenpreparingasampleofanon-lysogenicphage3噬菌体DNA的制备3噬菌体DNA的制备Purification
ofλphage3.4纯化M13DNAPreparationofM13DNAfromaninfectedcultureofbacteria.