CN2020100331442一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111189904A
(43)申请公布日2020.05.22
(21)申请号202010033144.2
(22)申请日2020.01.13
(71)申请人深圳华大临床检验中心
地址518083广东省深圳市盐田区盐田街
道北山工业区11栋1、3、4、5楼
(72)发明人张可人任艳张宇星林志龙
陈秋实李思奇潘火珍王欣然
张元良
(74)专利代理机构深圳鼎合诚知识产权代理有
限公司44281
代理人罗瑶彭家恩
(51)Int.Cl.
G01N27/62(2006.01)

权利要求书1页说明书8页附图1页
(54)发明名称
一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方
法
(57)摘要
本发明提供一种检测生物样本中的蛋白质
复合体的方法，包括共价交联、变性处理、溶液置
换、免疫共沉淀和质谱分析步骤。本发明通过变
性处理步骤破坏蛋白三维结构而使肽链散开，以
减少肽链的空间位阻效应，可以使蛋白质复合体
更好地被特异性抗体识别。而且，由于变性处理，
埋藏于肽链疏水中心的抗原决定簇暴露出来作
为线性表位，可以采用针对线性表位的抗体进行
免疫共沉淀，为免疫共沉淀提供了新颖的思路。
本发明的检测方法有利于开展蛋白质复合体和
蛋白质相互作用的研究。
CN111189904A
CN111189904A权利要求书1/1页

1.一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，所述蛋白质复合体包含目标蛋白和与
所述目标蛋白相互作用的结合蛋白，所述方法包括以下步骤：
共价交联：用化学交联剂使所述蛋白质复合体在非蛋白质变性条件下发生共价交联反
应，以使所述蛋白质复合体稳定化；
变性处理：将所述蛋白质复合体进行蛋白变性处理，以破坏维持蛋白三维结构的弱相
互作用力；
溶液置换：使经变性处理的蛋白质复合体处于适合进行免疫共沉淀的溶液体系中；
免疫共沉淀：使针对所述目标蛋白的特异性抗体与经过溶液置换处理的所述蛋白质复
合体进行免疫共沉淀，以捕获所述蛋白质复合体，并通过捕获所述特异性抗体使所述蛋白
质复合体与所述生物样本分离，并将所述特异性抗体从所述蛋白质复合体洗脱，得到纯化
的所述蛋白质复合体；
质谱分析：将纯化的所述蛋白质复合体进行酶解形成肽段，然后进行质谱分析。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白质复合体位于细胞内，所述
共价交联反应在所述细胞内原位进行；或者，所述蛋白质复合体在细胞提取液中，所述共价
交联反应在所述细胞提取液中进行。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述化学交联剂为二琥珀酰亚胺
亚砜(DSSO)或二琥珀酰亚胺二丁酸(DSBU)。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述变性处理采用化学变性方法或者
物理变性方法。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述化学变性方法采用尿素蛋白变性
方法、丙酮沉淀方法或者改变缓冲液中的渗透质的方法。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述尿素蛋白变性方法为8M尿素蛋白
变性方法。
7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述物理变性方法采用加热变性方
法。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述免疫共沉淀步骤中，所述特异
性抗体为针对天然形式的所述目标蛋白的抗体，或者为针对所述目标蛋白中的线性表位的
抗体。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述溶液置换步骤中，所述适合进
行免疫共沉淀的溶液体系为非变性蛋白裂解液。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述分离纯化步骤使用蛋白A包被的
磁珠或蛋白G包被的磁珠来进行。

2
CN111189904A说明书1/8页

一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法

技术领域
[0001]本发明属于生化分析技术领域，尤其属于蛋白质分析技术领域，具体涉及一种检
测生物样本中的蛋白质复合体的方法，该方法可以研究蛋白质相互作用。

背景技术
[0002]生物体内存在众多的蛋白质(包括酶类)，各种蛋白质以及蛋白质之间的相互作
用，对于维持生物体的正常生理功能都起到重要的作用。蛋白质相互作用是指两个或两个
以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。蛋白质相互作用涉及几乎所有
的生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导和代谢等等。而且，许
多具有重要功能的蛋白质分子常以二聚体、三聚体或寡聚体的形式发挥作用，这些蛋白间
的相互作用对其生理功能的实现十分重要。研究蛋白相互作用，不仅可以从分子水平上揭
示蛋白质的功能，而且对于研究生物体的生长、发育、分化和凋亡等生命活动规律至关重
要，为探讨重大疾病的机理、疾病治疗、疾病预防和新药开发提供重要的理论基础。研究蛋
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